[發明專利]用于快速繁殖過表達bFGF的C17.2神經干細胞的組合物

有效

• 申請號: 201810022014.1
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108441479B
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發明（設計）人: 徐麗婉;朱思品;徐家科;吳琨
• 申請（專利權）人: 暨賽再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0797
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發明屬于細胞培養領域，更具體涉及一種快速繁殖過表達bFGF的C17.2神經干細胞的組合物。本發明提供了一種快速繁殖過表達bFGF的C17.2神經干細胞的組合物，該組合物包括肉蓯蓉苷和蛇床子素。在一些優選實施例中，所述組合物由DMEM培養基或DMEM/F12培養基、B27、谷氨酰胺、肉蓯蓉苷和蛇床子素組成。本發明提供的用于體外培養過表達bFGF的C17.2神經干細胞的組合物，體外培養時可有效擴增過表達bFGF的C17.2神經干細胞，神經干細胞增殖能力強，且不易自分化，具有重要的臨床價值。

技術領域

本發明屬于細胞培養領域，更具體涉及一種快速繁殖過表達bFGF的C17.2 神經干細胞的組合物。

背景技術

缺血性腦卒中是因腦血栓形成或腦栓塞所致腦供血障礙而引起的局部腦組織缺血、缺氧，進而引起腦組織軟化、死亡。缺血性腦卒中不僅具有發病率和死亡率高的特點，還具有高致殘率及高復發率的特點，給家庭和社會帶來了沉重的經濟負擔和社會問題，是當今迫切需要解決的醫學難題。目前缺血性腦卒中的根本和最有效治療措施是超早期溶栓治療。超早期溶栓治療可以使閉塞血管再通恢復血液供應。但由于溶栓治療時間窗短暫(發病后3小時內)，并具有嚴格的適應癥和禁忌癥，在美國僅有3％～5％的急性缺血性腦卒中患者從中受益?？鼓?、抗血小板等藥物治療和支架置入等介入治療手段雖有一定效果，但治療結果并不令人滿意。近年來，人們越來越關注采用干細胞移植的方式來治療缺血性腦卒中。干細胞移植能夠改善缺血性腦卒中造成的神經功能缺陷。

堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是由155個氨基酸組成的18kD多肽，主要分布于垂體、腦和神經組織及視網膜、腎上腺、胎盤等組織，可促進來源于中胚層和神經外胚層的多種類型細胞增殖、分化，具有廣泛的生物學效應。bFGF 在成年哺乳動物腦組織中呈低水平表達，主要由星形膠質細胞產生，但在腦組織損傷后bFGF表達顯著上調。bFGF促進血管生成、軸突再生、神經保護、組織修復、動員內源性神經干細胞，在中樞神經系統發育與損傷修復中具有重要作用。在局灶性腦缺血損傷大鼠模型中，bFGF抑制神經細胞凋亡，增加腦缺血區血液供應，顯著縮小腦梗塞面積，改善神經功能障礙。

盡管動物實驗結果令人振奮，但bFGF治療缺血性腦卒中的II/III期臨床試驗結果并不理想，因出現低血壓、白細胞升高等全身性不良反應而被中止試驗。臨床試驗結果不佳的主要原因為：bFGF體內半衰期短，靜脈給藥后迅速降解，難以保持其生物活性；bFGF是生物大分子，難以透過血腦屏障；FGF受體體內分布廣泛，存在于全身許多組織器官，經靜脈全身給藥副作用大。

所以將干細胞移植和bFGF兩者聯合起來，將bFGF基因序列利用基因轉染技術插入到干細胞中，使得干細胞能夠高表達bFGF蛋白，對于治療缺血性腦卒中是一個新的思路。C17.2神經干細胞系是經過v-myc基因改造后得到的永生化的細胞，最早是從新生小鼠的小腦中分離的到的。C17.2神經干細胞系是一種很好的治療缺血性腦卒中的細胞來源。因此，本申請發明人構建了過表達bFGF蛋白的C17.2神經干細胞用于治療缺血性腦卒中。干細胞表達的bFGF蛋白一方面可以提高移植的干細胞在缺血性微環境下的生存能力，又可以作為蛋白治療藥物去改善神經功能。而干細胞一方面作為表達bFGF蛋白的載體，避免了bFGF蛋白作為蛋白藥物半衰期段、難以透過血腦屏障、全身反應等缺陷，另一方面也使得移植干細胞本身的存活率升高，同時bFGF蛋白的促分化的功能可以促進干細胞的分化，能夠更好的改善缺血性腦卒中后的神經功能缺陷。

然而，由于神經干細胞需要在體外進行擴大培養，而神經干細胞體外增殖能力弱，機制不明，給臨床應用帶來了很大困難。我們構建的過表達bFGF的C17.2 神經干細胞同樣面臨這些問題，常用的添加bFGF，表皮生長因子(EGF)，抗生素，N2/B27，谷氨酰胺等添加劑成分的無血清培養基，培養過表達bFGF的C17.2 神經干細胞，體外增殖差，且易自發分化，失去干細胞的特性和功能。

發明內容