[發明專利]一種長期保存過表達ANG-1的EPC的保存液

有效

• 申請號: 201810021912.5
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN107980767B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 朱思品;徐家科;徐麗婉;吳琨
• 申請（專利權）人: 暨賽再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 廣州勝沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 孫文卉

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種細胞保存液，具體涉及一種長期保存過表達ANG?1的EPC的保存液。所述保存液包括以下組分：白蛋白、維生素、肌苷、低分子右旋糖酐、氯化鈉、氯化鉀、乙醇、甘油、血管內皮生長因子、乙二胺四乙酸二鈉、醋酸、醋酸鈉、復方氨基酸和注射用水。該保存液無毒環保、成分明確、安全穩定，便于細胞保存和運輸；本發明的長期保存過表達ANG?1的EPC的保存液能提高細胞的保存時間和保存率，能維持細胞的高活力和生物學特性，具有廉價、高效、無毒的優勢。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種長期保存過表達ANG-1的EPC的保存液。

背景技術

由于創傷、感染、腫瘤等原因造成的各種類型骨缺損是我們臨床上遇到的常見問題。骨組織工程技術的逐漸興起為骨缺損的修復提供了有效的解決策略。但在應用大塊組織工程骨修復大段骨缺損時，其核心部位往往發生缺血壞死，導致修復失敗，其主要原因就在于未能很好的解決組織工程骨的血管化問題，血管化問題現已成為制約組織工程骨應用于臨床的“瓶頸”。血管生成素(Angiopoietin，ANG)是一種重要的與血管生成相關的因子，特別是血管生成素-1(Angiopoietin-1，ANG-1)特異性作用于內皮細胞Tie2受體，可召集血管周細胞和平滑肌細胞，通過內皮周圍支持細胞的聚集，包裝內皮管道，形成完整的血管壁，由單內皮細胞層向多細胞層過度，ANG-1能夠完成血管的精細結構以及血管成熟，有效的防止炎癥及VEGF所致的血管通透性增加，減少滲出水腫等副反應。血管內皮祖細胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)是一群具有游走特性，尚未表達成熟血管內皮細胞表型，能分化為血管內皮細胞直接參與血管形成。它在骨髓、臍帶血及外周血中均存在，并能在出生后的血管新生過程中有很強的促血管生成作用，并以血管發生方式形成新生血管。然而由于EPCs的細胞數量有限，獲取困難，體外培養時需要擴增，培養周期長，且需要經FN介導貼壁生長才有利于其存活，這些不足限制了其在動物實驗及臨床研究中的應用。將ANG-1基因作為目的基因轉染EPCs，使其在EPCs內持續、高效的表達，優化EPCs促血管新生的效果，再將這種轉染細胞種植于多孔生物活性玻璃內以構建血管化組織工程骨，最后再植入動物體內節段性骨缺損模型中，對該多孔復合活性材料的成骨、血管化機理，特別是血管化對材料成骨方面的影響進行深入研究，尤其期待其能夠解決骨組織工程研究中的“瓶頸”--血管化問題。對于骨組織工程生物材料的設計，組織工程應用開發研究都有著重要的現實意義和廣闊的應用前景。

雖然細胞治療的臨床應用前景已經得到了廣泛認可，但是在實際應用仍有許多問題需要解決。細胞的生物活性直接影響了其治療效果。因此，如何維持種子細胞的高活力成為了治療關鍵。在此之前，人們用生理鹽水或葡萄糖溶液作為種子細胞的保存液，生理鹽水作為常用的輸注介質，在臨床應用上方便安全，但是細胞在生理鹽水中活性的下降速度非常快，10小時之內細胞的活性喪失就達到30％之多，甚至會由于缺乏營養、溶液等張力或等滲力存在差異等原因，導致細胞在長期保存或運輸中出現活力低下、大量溶脹死亡等現象。

目前，中國專利CN105028389B公開了一種紅細胞保存液，該紅細胞保存液的組成為腺嘌呤0.3-0.5g/L、葡萄糖25-35g/L、檸檬酸鈉6-10g/L、肌苷0.2-0.4g/L、氯霉素0.2-0.3g/L、硫酸新霉素0.08-0.12g/L、氯化鈉2.5-3.5g/L、磷酸二氫鈉0.04-0.06g/L。中國專利CN106386785B公開了一種細胞保存液及其在流式樣本保存中的應用，該細胞保存液其pH7.2-7.5，溶質由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、KCl、聚乙二醇和氯化鉻以及任選的抗凝劑組成。中國專利CN104041484B公開了一種細胞保存液，它由氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉、PEG10000、Proclin300、甲醇、醋酸-醋酸鈉緩沖液組成。