[發(fā)明專利]一種杏鮑菇多糖的提純方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810021869.2
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108191991B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭恒光;陳君琛;翁敏劼;湯葆莎;吳俐
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

本發(fā)明公開了一種杏鮑菇多糖的提純方法，屬于食品、醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明通過在杏鮑菇水提液中添加特定的甲殼素固定化蛋白酶，將提取液中的大分子蛋白質(zhì)降解成小分子肽或氨基酸，然后采用透析或超濾技術(shù)處理提取液，棄去透過液，保留截留液，再將截留液干燥，進(jìn)而得到純度更高的杏鮑菇多糖粉末的方法。本發(fā)明是一種將固定化酶技術(shù)同透析技術(shù)（或超濾技術(shù)）相結(jié)合，提高杏鮑菇水提物中粗多糖含量的方法。該方法可將杏鮑菇水提物中的蛋白質(zhì)含量從25%左右降低到3%以下，同時還去除了大量單糖、低聚糖、氨基酸以及小肽等低分子量雜質(zhì)，杏鮑菇多糖純度從45%提純到90%以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種杏鮑菇多糖的提純方法，屬于食品、醫(yī)藥領(lǐng)域，也可以歸入食用菌深加工技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

杏鮑菇（Pleurotus eryngii Quel）別名剌芹側(cè)耳，隸屬于真菌門、擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬，是近年開發(fā)栽培比較成功的珍稀食用菌新品種。目前，國內(nèi)杏鮑菇的生產(chǎn)發(fā)展十分迅速，已從季節(jié)性栽培向工廠化栽培轉(zhuǎn)變。杏鮑菇栽培和加工過程會產(chǎn)生大量的副產(chǎn)物（如畸形菇、菇腳等），其產(chǎn)量可達(dá)總生物量的20%以上，可為杏鮑菇多糖的制備提供充足的原料，具有良好的開發(fā)前景。另一方面，大量研究表明，杏鮑菇多糖具有抗腫瘤、抗氧化、抑菌、降血脂、降血脂、降膽固醇、抗疲勞、抗衰老等多種生物活性，具有較高的開發(fā)利用價值。杏鮑菇多糖含有20%左右的蛋白質(zhì)，其分子量主要分布在32K道爾頓區(qū)間，大約由142個葡萄糖和58個氨基酸結(jié)構(gòu)單元通過化學(xué)鍵連接而成。

粗多糖通常需要進(jìn)一步提純后使用。其中，脫除蛋白質(zhì)雜質(zhì)是多糖提純的一個重要步驟。大量科學(xué)研究表明，無論是從植物中提取的粗多糖，還是微生物分泌的胞外多糖，幾乎都含有蛋白質(zhì)和其他小分子物質(zhì)（無機(jī)鹽、單糖、色素、脂肪等）雜質(zhì)。其中，蛋白質(zhì)含量較高，它不僅和多糖性質(zhì)相近，而且還和多糖以蛋白聚糖的形式結(jié)合，因此采用一般的提純方法難以將它們完全分開。評判一種多糖提純方法的好壞，通常以蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率為標(biāo)準(zhǔn)。

目前，科研人員已經(jīng)開發(fā)出來了多種多糖去蛋白的方法，如sevag法（即：氯仿-正丁醇法）、三氯乙酸法、等電點(diǎn)法、酒精變性法、大孔樹脂吸附法、層析法、蛋白酶水解法、聯(lián)用法等等。盡管如此，這些方法依然不夠完美，需要進(jìn)一步完善。其中，Sevag 法和乙醇變性法中使用了大量揮發(fā)性有機(jī)溶劑，溶劑回收比較困難，并且有燃燒和爆炸的風(fēng)險；三氯乙酸法和等電點(diǎn)法在去除蛋白質(zhì)同時去除了大量蛋白聚糖，造成多糖得率降低，而且產(chǎn)生大量酸性廢水；大孔樹脂吸附法和層析法難以工業(yè)化生產(chǎn)。游離蛋白酶直接水解法固然簡單，但由于蛋白酶本身就是蛋白質(zhì)，加入游離蛋白酶就必然會給多糖帶入新的蛋白質(zhì)雜質(zhì)，使多糖中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)不能完全去除。相反，本發(fā)明采用固定化蛋白酶水解，既可以達(dá)到酶解多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的目的，又不會給多糖帶入新的蛋白質(zhì)雜質(zhì)，是一種更為理想的去除多糖中蛋白質(zhì)雜質(zhì)的方法。由于固定化蛋白酶不溶于水，酶解結(jié)束后，只需簡單過濾就可以將其從溶液中徹底分離出來，無需像使用游離蛋白酶那樣進(jìn)行滅酶操作。另外，固定化蛋白酶可重復(fù)使用，使用成本更低。當(dāng)然，固定化蛋白酶和非固定化的游離蛋白酶相比也有缺點(diǎn)。固定化過程往往會造成酶的部分失活，酶活力下降。因此，若要完成同樣的酶解工作，固定化蛋白酶的添加濃度比非固定化酶更大，酶解速率偏低。另一方面，由于不同種類蛋白酶的酶切位置不同，所以采用單一蛋白酶往往無法獲得較高的水解度，實(shí)踐中往往采用多種蛋白酶組合水解蛋白質(zhì)。

透析和超濾都是借助半透膜孔徑大小對不同分子量物質(zhì)進(jìn)行機(jī)械篩分的。透析膜是一種擴(kuò)散膜，而超濾膜是一種壓力活性膜。透析法僅需借助半透膜袋就可操作，而超濾法則需要借助超濾裝置。透析法雖然比超濾法簡單，但是其處理樣品體積較小，而且非常耗時，因而僅適合在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用。超濾法方便快捷，處理量可大可小，在實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)上都已得到廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)不足，是要提供一種改進(jìn)的杏鮑菇多糖提純方法。本發(fā)明的方法可將杏鮑菇水提物中的蛋白質(zhì)含量從25%左右降低到3%以下，同時還去除了大量單糖、低聚糖、氨基酸以及小肽等低分子量雜質(zhì)，杏鮑菇多糖純度從45%提純到90%以上。