[發明專利]修飾的NK細胞及其用途

在審

• 申請號: 201810021212.6
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108300699A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發明（設計）人: 藍輝耀
• 申請（專利權）人: 香港中文大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本申請提供了修飾的自然殺傷(NK)細胞，由于其在這些細胞中有阻抑的Smad3活性，其對TGF?β刺激具有抗性。還提供了包含這些修飾的NK細胞的組合物，以及通過使用所述細胞治療癌癥的方法。

相關申請

本申請要求于2017年1月13日提交的美國臨時專利申請第62/446,106號的優先權，將其內容出于所有目的整體并入本文。

發明背景

癌癥為可以影響身體任意部位的一大類疾病的通用術語。癌癥的一個典型特征為異常細胞的快速增殖，所述異常細胞的生長超出其通常的界限。然后，癌細胞可以以被稱為轉移的過程侵入身體的相鄰部位，并擴散到其它器官。轉移是癌癥死亡的主要原因，并且也可以被癌癥周圍的細胞(被稱為癌癥基質細胞)或癌癥微環境促進。

據世界衛生組織(WHO)稱，癌癥是全世界死亡的主要原因，2008年死亡人數為760萬(占所有死亡的約13％)。肺癌、胃癌、肝癌、結腸癌和乳腺癌每年導致大部分的癌癥死亡。盡管在生物醫學中進行了大量的研究工作和技術進步，但預測全世界癌癥死亡將持續升高，到2030年估計有1310萬例癌癥死亡。

由于癌癥的普遍性及其對人類的顯著影響，仍然迫切需要開發新的且更有效的癌癥治療策略。本申請解決了這一需求和其它相關需求，因為其提供了抗癌治療的新策略：通過遺傳修飾的自然殺傷(NK)細胞，使得Smad3的表達和/或活性在這些細胞中基本上被阻抑，這些NK細胞的癌癥殺傷活性被顯著增強。因此，這些Smad3-敲低的NK細胞是癌癥治療中新型且有效的工具。

發明概述

本申請涉及用于癌癥免疫治療的新方法和組合物。具體地，本申請的發明人發現，通過抑制免疫效應細胞，如自然殺傷(NK)細胞中的Smad3的內源性表達和活性，效應細胞變得對TGF-β刺激具有抗性并且表現出顯著增強的殺癌活性。因此，在第一方面，本申請提供了新的修飾的免疫效應細胞(例如，NK細胞)，其中與相同種類的未修飾的親本細胞相比，修飾的細胞中的Smad3活性被抑制或降低/阻抑，或甚至完全消除。例如，與未修飾的親本細胞相比，在修飾的細胞中，Smad3活性被抑制50％、70％、80％或更多。在一些情況下，Smad3活性被去除。Smad3活性的變化可能是由于Smad3基因組序列已經被改變(如通過取代、缺失、插入或完全除去整個序列被改變)所引起的。在一些情況下，修飾的細胞在其基因組中包含編碼對應于Smad3基因組序列的至少一個區段或與其互補的多核苷酸序列的外源序列，此類序列的表達(尤其是在RNA水平)導致Smad3活性的阻抑。例如，可以通過編碼Smad3-破壞的序列(如shRNA、反義、CRISPR-Cas9或Smad3的特異性抑制劑)的病毒和/或非病毒載體來實現Smad3活性的抑制/消除。在一些情況下，效應細胞為NK細胞，例如，親本NK細胞為人NK92細胞。在替代方案中，其它細胞類型可以用于產生修飾的Smad3敲低的細胞，例如B細胞亞群、T細胞亞群、巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和肥大細胞，以及非免疫細胞，包括干細胞或成纖維細胞。用于此類操作的合適的細胞可以為天然存在的細胞以及人工工程化的或重組產生的細胞，例如，遺傳修飾的細胞，如嵌合抗原受體(CAR)T細胞。

在第二方面，本申請提供了包含上文和本文所述的修飾的細胞，尤其是修飾的NK細胞，以及生理學可接受的賦形劑的組合物。在一些實施方案中，所述組合物被配制用于注射，例如，其可以被配制用于皮下注射、肌內注射、靜脈內注射、腹膜內注射或瘤內注射。在一些實施方案中，所述組合物被配制成施用于患者的劑型，例如，其可以被配制和包裝成多個單位(例如，小瓶)，每個單位對于多天或多周治療過程而言具有足夠的量。