[發明專利]檢測胰島素抵抗的質譜模型的制備方法

有效

• 申請號: 201810019942.2
• 申請日: 2016-08-16
• 公開（公告）號: CN108318573B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 馬慶偉;曲海霞
• 申請（專利權）人: 北京毅新博創生物科技有限公司
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種胰島素抵抗篩查的方法，該方法基于基質輔助激光解析電離飛行時間質譜儀采用弱陽離子結合表面(WCX)芯片檢測胰島素抵抗相關的血清多肽，通過統計模型建立的診斷模型。發明內容具體包括：樣品前處理的方法與質譜檢測到的12條用于建模與判別診斷的血清多肽，以及基于其中3條多肽及12條多肽分別建立的判別模型。該方法操作簡單，準確性高，為胰島素抵抗篩查提供了新的思路。

技術領域

本發明涉及胰島素抵抗檢測領域，具體是通過研究比較胰島素抵抗與正常人群的血清多肽譜，得到與胰島素抵抗相關的多肽譜庫，為胰島素抵抗的臨床診斷提供了豐富的分子靶標。

背景技術

胰島素抵抗(insulin resistance，IR)即指一定量的胰島素與其特異性受體結合后所產生的生物效應低于正常。表現為外周組織尤其是肌肉、脂肪組織對葡萄糖攝取減少及胰島素抑制肝葡萄糖輸出的作用減弱，是肥胖、高血壓、糖尿病及動脈粥樣硬化等多種疾病的共同危險因素和基礎。由于胰島素抵抗參與了眾多疾病的形成，并為機體帶來了嚴重的后果，例如，導致胰島素促進葡萄糖攝取和利用的效率下降，機體代償性的分泌過多胰島素產生高胰島素血癥，以維持血糖的穩定。胰島素抵抗易導致代謝綜合征和2型糖尿病。50年代Yallow等應用放射免疫分析技術測定血漿胰島素濃度，發現血漿胰島素水平較低的病人胰島素敏感性較高，而血漿胰島素較高的人對胰島素不敏感，由此提出了胰島素抵抗的概念。

胰島素抵抗發生在2型糖尿病發病之前，并貫穿于2型糖尿病的整個過程。在發病前，注重胰島素抵抗的改善可效遏制2型糖尿病的發生和發展。胰島素抵抗發生的本質是能量過剩，當人體攝入的熱卡超過人體的生理需要，過多的熱量儲存在脂肪、肝臟、肌肉中，導致這些組織對胰島素不敏感，而產生胰島素抵抗，胰島B細胞為了克服胰島素抵抗需要分泌更多的胰島素，過多時到了胰島素抵抗的晚期，胰島功能衰竭，不能分泌出正常量的胰島素，胰島B細胞的長期的超負荷工作使其功能逐漸衰竭，而發生糖尿病。所以抑制能量過剩，才是遏制胰島素抵抗發生的根本。如何才能抑制能量過剩呢？最簡單的方法就是少吃，多運動！平時多攝入低熱卡的食物(如蔬菜、菇類、魔芋等)，避免高熱卡食物(啤酒、飲料、堅果、動物油等)。同時可以使用抑制食欲的降糖藥物如諾和力、百泌達等。

目前胰島素抵抗檢測方法有正常血糖高胰島素鉗技術、胰島素耐量試驗、微小模型計算公式、空腹胰島素、空腹血糖/空腹胰島素等。正常血糖高胰島素鉗技術是目前公認的檢測胰島素抵抗的方法，并被認為是評價其他檢測胰島素抵抗方法的金標準(劉建雷等，小鼠擴展胰島素鉗夾術中糖代謝的變化，《中國糖尿病雜志》，2008年第6期；司曉晨等，胰島素鉗試驗評定兩種胰島素抵抗大鼠模型，《南京中醫藥大學學報》，2003年11月第19卷第6期)。該方法主要包括：采用胰島素鉗夾術處理動物或患者血管，以放射性葡萄糖作為示蹤劑，定期取血樣監測體內糖代謝的動態改變。但該方法存在取血次數太多、費用昂貴、費時等局限性，不適用于常規臨床檢測。微小模型計算公式也存在上述局限性。

胰島素耐量試驗(王軍，改良胰島素耐量試驗在2型糖尿病中的應用，《山東醫藥》，2002年第11期)，糾正了胰島素缺乏對胰島素敏感性測定的影響，但如存在低血糖的風險，則會夸大機體的胰島素敏感性。空腹胰島素、空腹血糖/空腹胰島素方法，對于糖尿病人的檢測會受到限制，僅適用于非糖尿病人。由此可見，目前尚缺乏能早期篩查比較適用于臨床檢測胰島素抵抗的技術方法。

目前，逐漸出現了質譜技術來監測胰島素抵抗的生物標志物，例如羅天杰(PACAP衍生多肽RDB的高效制備及其改善胰島素抵抗作用的初步研究，《藥物生物技術》，2013)利用重疊延伸PCR法合成促胰液素/胰高血糖素/血管活性腸肽(VIP)家族中的新成員PACAP，并通過ESI‐MASS技術檢測了M_t為3990k的特征多肽即為所重組表達的PACAP。但該方法只是使用質譜技術驗證所克隆邊導的多肽標志物，并不涉及直接使用質譜技術檢測與胰島素抵抗的相關標志物。