[發(fā)明專利]一種利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810018169.8 | 申請(qǐng)日： | 2018-01-09 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107964556B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-05-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳乃東;谷仿麗;戴軍;劉東;宋向文;臧永軍;朱富成;王芳;姜雪萍;鮑玲玲;陳艷君;鄭詮;陳乃富 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 皖西學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12P19/60 | 分類號(hào)： | C12P19/60;C12N1/14;C07H17/07;C07H1/06;C12R1/645 |
| 代理公司： | 合肥市浩智運(yùn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34124 | 代理人： | 王志興 |
| 地址： | 237000 *** | 國(guó)省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 微生物 轉(zhuǎn)化 山奈酚 生產(chǎn) 紫云英 方法 | ||
1.一種利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)選取藍(lán)色犁頭霉菌，菌種活化后，制成種子液轉(zhuǎn)接到液體馬鈴薯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)；培養(yǎng)期間，于發(fā)酵液中加入山奈酚；所述藍(lán)色犁頭霉菌的拉丁名稱為：Absidiacoerulea，于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心保藏，菌株保藏編號(hào)為：CICC 40302；
(2)加入山奈酚后的第2-4天向發(fā)酵液中添加8-12％葡萄糖或13-17％蔗糖作為轉(zhuǎn)化促進(jìn)劑以轉(zhuǎn)化發(fā)酵液，再繼續(xù)震蕩培養(yǎng)；
(3)加入山奈酚后的第5-8天，取出發(fā)酵液并提取分離紫云英苷，得轉(zhuǎn)化總提物；
(4)將上述步驟獲得的轉(zhuǎn)化總提物通過(guò)硅膠柱層析分離、葡聚糖凝膠純化，最終獲得目標(biāo)產(chǎn)物-紫云英苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(1)中菌種的活化方法為：將藍(lán)色犁頭霉菌菌株接種于固體馬鈴薯培養(yǎng)基平板上，置于恒溫箱中，23-26℃培養(yǎng)1-2d，得活化的藍(lán)色犁頭霉菌菌株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(1)中藍(lán)色犁頭霉菌種子液的制備方法為：將活化后的藍(lán)色犁頭霉菌菌株在無(wú)菌條件下以接種環(huán)挑取菌絲接種于液體馬鈴薯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，以濃度為(2-4)×108CFU/mL的菌液作為種子液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(1)中種子液轉(zhuǎn)接到液體馬鈴薯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)的具體方法為：取種子液接種至30-60倍體積的液體馬鈴薯培養(yǎng)基中，24-26℃恒溫震蕩培養(yǎng)22-26h，再將山奈酚溶于丙酮成飽和溶液，按丙酮含量3-5％加入發(fā)酵液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(3)中發(fā)酵液中紫云英苷的具體提取分離方法為：加入山奈酚后的第5-8天，取出發(fā)酵液，18-22kHz超聲處理8-12min后，以等體積乙酸乙酯萃取2-4次，合并萃取液，于48-52℃減壓濃縮，獲得轉(zhuǎn)化總提物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(4)中硅膠柱層析分離的具體方法為：
a.15-30倍轉(zhuǎn)化總提物質(zhì)量的柱層層析硅膠作為分離硅膠，干法裝柱；
b.將轉(zhuǎn)化總提物溶于甲醇，加入1-3倍總提物質(zhì)量的柱層層析硅膠作為拌樣硅膠，攪拌均勻后揮干溶劑，干法上樣；
c.乙酸乙酯-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，收集10:1洗脫部位。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述柱層層析硅膠為200-300目硅膠，在使用前先于100-110℃烘箱中活化1-3h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微生物轉(zhuǎn)化山奈酚生產(chǎn)紫云英苷的方法，其特征在于，所述步驟(4)中葡聚糖凝膠純化的具體方法為：所獲樣品溶于甲醇，葡聚糖凝膠柱氯仿-甲醇＝1:1為洗脫劑純化。
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