[發明專利]一種快速選擇攜帶qSBRLEYD8A基因的抗紋枯病水稻的方法

在審

• 申請號: 201810017321.0
• 申請日: 2018-01-05
• 公開（公告）號: CN108070672A
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 曾宇翔;楊長登;季芝娟;梁燕
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;A01H1/02;A01H1/04
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本發明公開了一種快速選擇攜帶qSBRLEYD8A基因的抗紋枯病水稻的方法。該方法是利用D804標記PCR擴增Lemont和揚稻4號組配的重組自交系分離群體內的不同株系，選擇帶型與親本揚稻4號一致的株系即是攜帶qSBRLEYD8A紋枯病抗性等位基因的株系。該方法相比傳統的田間接種鑒定方法更簡便快速，無需接種鑒定即可選出紋枯病抗性水稻，選擇的準確度比田間接種方法更高，可大大提高育種效率。

技術領域

本發明涉及一種利用D804標記快速選擇攜帶qSBRLEYD8A基因的抗紋枯病水稻的方法，該方法可利用D804標記快速選出抗水稻紋枯病的穩定株系。

背景技術

水稻是關乎我國的國家糧食安全的重要糧食作物。我國水稻育種界選育紋枯病抗病水稻的傳統方法都是通過表型選擇進行的，即用紋枯病致病菌在不同的水稻發育時期對水稻單株進行接種鑒定。由于傳統的接種鑒定大部分是在田間種植條件下進行的，接種鑒定的結果誤差大，準確性差，而且不同年份的接種結果存在差異，導致接種鑒定結果的準確率低。通過分子標記對水稻紋枯病抗性相關基因進行選擇可以在水稻苗期即對紋枯病抗性進行選擇，選擇的準確率高，可以大大提高育種效率。水稻的紋枯病抗性是一個數量性狀，受多個數量性狀基因座位(QTL)控制。為了有效的提高育種效率，加快育種進程，本發明提出一種利用D804標記快速選擇攜帶qSBRLEYD8A基因的抗紋枯病水稻的方法。本發明相比傳統的利用紋枯病致病菌進行接種鑒定的表型選擇方法更簡便快速，無需進行傳統的紋枯病菌接種鑒定，而且相比接種鑒定方法的準確度更高，因此大大提高了育種效率。

發明內容

本發明包括以下步驟：

(1)將水稻品種Lemont作為母本與水稻品種揚稻4號作為父本進行雜交，并構建重組自交系分離群體Fn，Fn中的n≥5；

(2)用D804分子標記PCR擴增步驟(1)獲得的重組自交系分離群體內的不同株系的葉片DNA，根據D804標記與水稻第8染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD8A連鎖的特點，將D804標記的PCR擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，選出與親本揚稻4號帶型相同的株系即是攜帶qSBRLEYD8A紋枯病抗性QTL的抗紋枯病水稻株系。

進一步地，所述步驟(2)中，D804標記并非等同于qSBRLEYD8A紋枯病抗性基因，由于D804標記與qSBRLEYD8A基因緊密連鎖，可以通過D804標記檢測快速獲得攜帶qSBRLEYD8A紋枯病抗性QTL的抗紋枯病水稻株系，該方法比傳統的紋枯病菌接種的抗性鑒定方法更簡便快速，無需接種鑒定即可準確選出抗水稻紋枯病的穩定株系。

具體實施方式

實施例1：在水稻品種Lemont和水稻品種揚稻4號雜交組配的F6代分離群體中，D804標記的應用。

1.將水稻品種Lemont作母本，與水稻品種揚稻4號作父本進行雜交并構建F6代分離群體(Lemont為來自美國的粳稻品種，揚稻4號為來自江蘇的秈稻品種，Lemont和揚稻4號由中國水稻研究所國家水稻種質資源中期庫提供)，這個包括219個株系在內的F6分離群體于2013年5月播種在杭州市富陽區中國水稻研究所試驗場。

2.利用標記D804對這個219個株系的分離群體內的每一株系進行PCR檢測，利用標記D804與基因qSBRLEYD8A連鎖的特點，可檢測出哪個株系在qSBRLEYD8A座位攜帶揚稻4號的抗病等位基因(用D804標記擴增揚稻4號的帶型來追蹤qSBRLEYD8A座位的揚稻4號抗病等位基因)；哪個株系在qSBRLEYD8A座位攜帶Lemont的感病等位基因(用D804標記擴增Lemont的帶型來追蹤qSBRLEYD8A座位的Lemont感病等位基因)。

3.選擇攜帶不同等位基因的株系以獲得平均病斑長度、平均病級不同的水稻材料(表1)。