[發明專利]一種利用兩個揚稻4號的紋枯病抗性基因的方法

在審

• 申請號: 201810017097.5
• 申請日: 2018-01-05
• 公開（公告）號: CN108103227A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 季芝娟;楊長登;曾宇翔;梁燕
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;A01H1/02;A01H1/04
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本發明公開了一種利用兩個揚稻4號的紋枯病抗性基因的方法。該方法是利用D467、D715標記分別PCR擴增Lemont和揚稻4號組配的重組自交系分離群體內的不同株系，選出D467標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，且D715標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，即是攜帶兩個來自揚稻4號的紋枯病抗性等位基因的雙抗紋枯病的水稻株系。該方法可同時聚合2個紋枯病抗性基因獲得抗紋枯病的水稻材料，可大大提高育種效率。

技術領域

本發明涉及一種利用兩個揚稻4號的紋枯病抗性基因的方法，該方法可利用兩個分子標記快速選育出聚合了qSBRLEYD4A與qSBRLEYD7A兩個紋枯病抗性基因的抗紋枯病的水稻新株系。

背景技術

水稻是關乎我國糧食安全的重要糧食作物。我國水稻育種界選育紋枯病抗病水稻的傳統方法都是通過表型選擇進行的，即用紋枯病致病菌在不同的水稻發育時期對水稻單株進行接種鑒定。由于傳統的接種鑒定大部分是在田間種植條件下進行的，接種鑒定的結果誤差大，準確性差，而且不同年份的接種結果存在差異，導致接種鑒定結果的準確率低。通過分子標記對水稻紋枯病抗性相關基因進行選擇可以在水稻苗期即對紋枯病抗性進行選擇，選擇的準確率高，可以大大提高育種效率。水稻的紋枯病抗性是一個數量性狀，受多個數量性狀基因座位(QTL)控制。水稻科研界目前已經定位出許多與水稻紋枯病抗性相關的QTL，但是哪些QTL是共同調控水稻紋枯病抗性的？哪些QTL可以同時應用在一個育種過程中？我們對這些問題的了解并不多。根據目前已經報道的與水稻紋枯病抗性基因連鎖的分子標記隨意將兩個不同的抗性基因聚合在一起，希望獲得抗性加強的水稻材料這樣一個美好的想法在實際操作過程中往往不可行，因為隨意選出的兩個抗性基因很有可能存在基因之間的上位性互作效應，導致聚合了2個抗性基因的材料的紋枯病抗性反而降低了。為了有效的提高育種效率，加快育種進程，本發明提出一種利用D467和D715兩個分子標記快速選育聚合了qSBRLEYD4A與qSBRLEYD7A兩個紋枯病抗性基因的水稻新株系的方法。本發明相比傳統的利用紋枯病致病菌進行接種鑒定的表型選擇方法更簡便快速，無需進行傳統的紋枯病菌接種鑒定，而且相比接種鑒定方法的準確度更高，因此大大提高了育種效率。

發明內容

本發明包括以下步驟：

(1)將水稻品種Lemont作為母本與水稻品種揚稻4號作為父本進行雜交，并構建重組自交系分離群體Fn，所述Fn中的n≥5；

(2)用分子標記D467與D715分別PCR擴增步驟(1)獲得的重組自交系分離群體內的不同株系的葉片DNA，根據D467標記與水稻第4染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD4A連鎖的特點，根據D715標記與水稻第7染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD7A連鎖的特點，將D467與D715標記的PCR擴增產物分別進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，選出D467標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，且D715標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，即是在qSBRLEYD4A與qSBRLEYD7A基因座位上攜帶兩個紋枯病抗性等位基因的雙抗紋枯病的穩定的水稻株系；選出D467標記擴增的帶型與Lemont帶型相同的株系，且D715標記擴增的帶型與Lemont帶型相同的株系，即是在qSBRLEYD4A與qSBRLEYD7A基因座位上攜帶兩個紋枯病感病等位基因的雙感紋枯病的穩定的水稻株系。

進一步地，所述步驟(2)中，D467標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，代表的是在qSBRLEYD4A基因座位攜帶紋枯病抗病等位基因的株系；D467標記擴增的帶型與Lemont帶型相同的株系，代表的是在qSBRLEYD4A基因座位攜帶紋枯病感病等位基因的株系；D715標記擴增的帶型與揚稻4號帶型相同的株系，代表的是在qSBRLEYD7A基因座位攜帶紋枯病抗病等位基因的株系；D715標記擴增的帶型與Lemont帶型相同的株系，代表的是在qSBRLEYD7A基因座位攜帶紋枯病感病等位基因的株系。