[發明專利]一種利用揚稻4號的三個紋枯病抗性基因的方法

在審

• 申請號: 201810017070.6
• 申請日: 2018-01-05
• 公開（公告）號: CN108034749A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發明（設計）人: 楊長登;曾宇翔;季芝娟;梁燕
• 申請（專利權）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種利用揚稻4號的三個紋枯病抗性基因的方法。該方法是利用D715、D804、D948三個標記分別PCR擴增Lemont和揚稻4號組配的重組自交系分離群體內的不同株系，將715標記擴增揚稻4號的帶型命名為A、擴增Lemont的帶型命名為D，將D804標記擴增揚稻4號的帶型命名為B、擴增Lemont的帶型命名為E，將D948標記擴增揚稻4號的帶型命名為C、擴增Lemont的帶型命名為F。選擇攜帶A、B、C三種帶型數目越多的株系即是越抗紋枯病的株系，選擇攜帶D、E、F三種帶型數目越多的株系即是越感紋枯病的株系。該方法可同時聚合來自揚稻4號的3個紋枯病抗性基因以選育抗紋枯病的水稻材料，可大大提高育種效率。

技術領域

本發明涉及一種利用揚稻4號的三個紋枯病抗性基因的方法，該方法可利用3個分子標記同時聚合來自揚稻4號的3個紋枯病抗性基因以選育抗紋枯病的水稻材料。

背景技術

水稻是關乎我國糧食安全的重要糧食作物。我國水稻育種界選育紋枯病抗病水稻的傳統方法都是通過表型選擇進行的，即用紋枯病致病菌在不同的水稻發育時期對水稻單株進行接種鑒定。由于傳統的接種鑒定大部分是在田間種植條件下進行的，接種鑒定的結果誤差大，準確性差，而且不同年份的接種結果存在差異，導致接種鑒定結果的準確率低。通過分子標記對水稻紋枯病抗性相關基因進行選擇可以在水稻苗期即對紋枯病抗性進行選擇，選擇的準確率高，可以大大提高育種效率。水稻的紋枯病抗性是一個數量性狀，受多個數量性狀基因座位(QTL)控制。水稻科研界目前已經定位出許多與水稻紋枯病抗性相關的QTL，但是哪些QTL是共同調控水稻紋枯病抗性的？哪些QTL可以同時應用在一個育種過程中？我們對這些問題的了解并不多。根據目前已經報道的與水稻紋枯病抗性基因連鎖的分子標記隨意將不同的幾個抗性基因聚合在一起，希望獲得抗性加強的水稻材料這樣一個美好的想法在實際操作過程中往往不可行，因為隨意選出的幾個抗性基因很有可能存在基因之間的上位性互作效應，導致聚合了多個抗性基因的材料的紋枯病抗性反而降低了。為了有效的提高育種效率，加快育種進程，本發明提出一種利用揚稻4號的三個紋枯病抗性基因的方法，該方法利用3個分子標記同時聚合了3個來自揚稻4號的紋枯病抗性基因，以培育抗紋枯病的水稻新株系，該方法可大大提高育種效率。

發明內容

本發明包括以下步驟：

(1)將水稻品種Lemont作為母本與水稻品種揚稻4號作為父本進行雜交，并構建重組自交系分離群體Fn，所述Fn中的n≥5；

(2)用分子標記D715、D804、D948分別PCR擴增步驟(1)獲得的重組自交系分離群體內的不同株系的葉片DNA，根據D715標記與水稻第7染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD7A連鎖的特點，根據D804標記與水稻第8染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD8A連鎖的特點，根據D948標記與水稻第9染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD9A連鎖的特點，將D715、D804、D948標記的PCR擴增產物分別進行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，將D715標記擴增揚稻4號的帶型命名為A，將D804標記擴增揚稻4號的帶型命名為B，將D948標記擴增揚稻4號的帶型命名為C，將D715標記擴增Lemont的帶型命名為D，將D804標記擴增Lemont的帶型命名為E，將D948標記擴增Lemont的帶型命名F；選擇攜帶A、B、C帶型數目越多的株系即是紋枯病抗性越強的株系，選擇攜帶D、E、F帶型數目越多的株系即是紋枯病抗性越差的株系。

進一步地，所述步驟(2)中，攜帶不同數目的A、B、C帶型的株系的紋枯病抗性按從強到弱排序為：聚合A、B、C全部三種帶型的株系＞攜帶A、B、C三種帶型中的任意兩種帶型的株系＞攜帶A、B、C三種帶型中的任意一種帶型的株系＞不攜帶A、B、C三種帶型中的任何一種帶型的株系；需要指出的是，上述排序大小僅適用于種植在同一個環境條件下對同一個Fn世代內的分離群體內的株系進行比較，所述Fn中n為固定數值。