[發(fā)明專利]一種快速選擇攜帶qSBRLEYD5A基因的抗紋枯病水稻的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810017005.3
• 申請(qǐng)日: 2018-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN108034748A
• 公開（公告）日: 2018-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊長登;曾宇翔;季芝娟;梁燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國水稻研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種快速選擇攜帶qSBRLEYD5A基因的抗紋枯病水稻的方法。該方法是利用D535標(biāo)記PCR擴(kuò)增Lemont和揚(yáng)稻4號(hào)組配的重組自交系分離群體內(nèi)的不同株系，選擇帶型與親本Lemont一致的株系即是攜帶qSBRLEYD5A紋枯病抗性等位基因的株系。該方法相比傳統(tǒng)的田間接種的抗性鑒定方法更簡便快速，無需接種鑒定即可選出紋枯病抗性水稻，選擇的準(zhǔn)確度比田間接種方法更高，可大大提高育種效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用D535標(biāo)記快速選擇攜帶qSBRLEYD5A基因的抗紋枯病水稻的方法，該方法可利用D535標(biāo)記快速選出抗水稻紋枯病的穩(wěn)定株系。

背景技術(shù)

水稻是關(guān)乎我國的國家糧食安全的重要糧食作物。我國水稻育種界選育紋枯病抗病水稻的傳統(tǒng)方法都是通過表型選擇進(jìn)行的，即用紋枯病致病菌在不同的水稻發(fā)育時(shí)期對(duì)水稻單株進(jìn)行接種鑒定。由于傳統(tǒng)的接種鑒定大部分是在田間種植條件下進(jìn)行的，接種鑒定的結(jié)果誤差大，準(zhǔn)確性差，而且不同年份的接種結(jié)果存在差異，導(dǎo)致接種鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確率低。通過分子標(biāo)記對(duì)水稻紋枯病抗性相關(guān)基因進(jìn)行選擇可以在水稻苗期即對(duì)紋枯病抗性進(jìn)行選擇，選擇的準(zhǔn)確率高，可以大大提高育種效率。水稻的紋枯病抗性是一個(gè)數(shù)量性狀，受多個(gè)數(shù)量性狀基因座位(QTL)控制。為了有效的提高育種效率，加快育種進(jìn)程，本發(fā)明提出一種利用D535標(biāo)記快速選擇攜帶qSBRLEYD5A基因的抗紋枯病水稻的方法。本發(fā)明相比傳統(tǒng)的利用紋枯病致病菌進(jìn)行接種鑒定的表型選擇方法更簡便快速，無需進(jìn)行傳統(tǒng)的紋枯病菌接種鑒定，而且相比接種鑒定方法的準(zhǔn)確度更高，因此大大提高了育種效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明包括以下步驟：

(1)將水稻品種Lemont作為母本與水稻品種揚(yáng)稻4號(hào)作為父本進(jìn)行雜交，并構(gòu)建重組自交系分離群體Fn，F(xiàn)n中的n≥5；

(2)用D535分子標(biāo)記PCR擴(kuò)增步驟(1)獲得的重組自交系分離群體內(nèi)的不同株系的葉片DNA，根據(jù)D535標(biāo)記與水稻第5染色體上的紋枯病抗性基因qSBRLEYD5A連鎖的特點(diǎn)，將D535標(biāo)記的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，選出與親本Lemont帶型相同的株系即是攜帶qSBRLEYD5A紋枯病抗性QTL的抗紋枯病水稻株系。

進(jìn)一步地，所述步驟(2)中，D535標(biāo)記并非等同于qSBRLEYD5A紋枯病抗性基因，由于D535標(biāo)記與qSBRLEYD5A基因緊密連鎖，可以通過D535標(biāo)記檢測(cè)快速獲得攜帶qSBRLEYD5紋枯病抗性QTL的抗紋枯病水稻株系，該方法比傳統(tǒng)的紋枯病菌接種的抗性鑒定方法更簡便快速，無需接種鑒定即可準(zhǔn)確選出抗水稻紋枯病的穩(wěn)定株系。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：在水稻品種Lemont和水稻品種揚(yáng)稻4號(hào)雜交組配的F6代分離群體中，D535標(biāo)記的應(yīng)用。

1.將水稻品種Lemont作母本，與水稻品種揚(yáng)稻4號(hào)作父本進(jìn)行雜交并構(gòu)建F6代分離群體(Lemont為來自美國的粳稻品種，揚(yáng)稻4號(hào)為來自江蘇的秈稻品種，Lemont和揚(yáng)稻4號(hào)由中國水稻研究所國家水稻種質(zhì)資源中期庫提供)，這個(gè)包括219個(gè)株系在內(nèi)的F6分離群體于2013年5月播種在杭州市富陽區(qū)中國水稻研究所試驗(yàn)場(chǎng)。

2.利用標(biāo)記D535對(duì)這個(gè)219個(gè)株系的分離群體每一株系進(jìn)行PCR檢測(cè)，利用標(biāo)記D535與基因qSBRLEYD5A連鎖的特點(diǎn)，可檢測(cè)出哪個(gè)株系在qSBRLEYD5A座位攜帶Lemont的抗病等位基因(用D535標(biāo)記擴(kuò)增Lemont的帶型來追蹤qSBRLEYD5A座位的Lemont抗病等位基因)；哪個(gè)株系在qSBRLEYD5A座位攜帶揚(yáng)稻4號(hào)的感病等位基因(用D535標(biāo)記擴(kuò)增揚(yáng)稻4號(hào)的帶型來追蹤qSBRLEYD5A座位的揚(yáng)稻4號(hào)感病等位基因)。

3.選擇攜帶不同等位基因的株系以獲得平均病斑長度、平均病級(jí)不同的水稻材料(表1)。