[發明專利]一種用于檢測氯吡格雷個體化用藥相關的基因多態性位點的核酸質譜檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201810014377.0
• 申請日: 2018-01-08
• 公開（公告）號: CN107904306B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 方春妮;楊文輝;詹杜清;陳榮山;謝文龍;肖辛野;鄭巧鳳;李奇淵;姚迅
• 申請（專利權）人: 廈門基源醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
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本發明公開了一種檢測15個與氯吡格雷個體化用藥相關的基因多態性位點的引物系統。基于該引物系統所制備的產品，能實現同時對與氯吡格雷個體化用藥相關的15個基因多態性位點進行檢測。使用該產品，對氯吡格雷服用者在15個基因多態性位點的基因型進行檢測，檢測結果結合其他臨床指標，可為臨床醫師合理利用氯吡格雷提供參考，切實推進氯吡格雷個體化用藥，降低不良反應的發生率。本發明能在一個反應體系中對不同基因上的15個基因多態性位點同時進行檢測，較測序、實時熒光定量PCR等技術成本更低，結果準確，操作更簡便，同時，對于患者而言，節省了檢測費用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種用于確定氯吡格雷個體化用藥相關的基因多態位點的檢測方法及產品，具體而言是利用多重PCR技術、單堿基延伸技術和質譜技術，對氯吡格雷個體化用藥相關的15個基因多態性位點進行檢測的方法及相應的試劑盒。

背景技術

氯吡格雷是一種噻吩并吡啶類化合物，它能不可逆地抑制血小板聚集，其作用機理是選擇性抑制位于血小板表面的、與腺苷酸環化酶偶聯的ADP受體，進而抑制纖維蛋白原與血小板的結合，從而阻止了血小板聚集。

氯吡格雷是最廣泛使用的抗血小板聚集藥物之一，可抑制動、靜脈內血栓形成，或使形成的血栓的體積減小，并抑制血小板脫顆粒反應，用于預防和治療因血小板高聚集引起的心、腦及其他動脈循環障礙疾病。氯吡格雷可延長出血時間，它有防止動脈粥樣硬化病人的缺血性中風、心肌梗死和血管性死亡的作用。據統計，臨床在使用氯吡格雷時，多達30％的患者未能達到預期藥效。造成氯吡格雷藥效的個體差異的原因很多，可分為非遺傳因素和遺傳因素。非遺傳因素主要有體重、高密度脂蛋白和甘油三酯水平、藥物的相互作用以及合并疾病等。近年的研究表明，遺傳因素在氯吡格雷藥效的個體差異的表現中起到一定的作用。影響氯吡格雷藥效的個體差異的遺傳因素是指與氯吡格雷的藥動學和藥效學有關的蛋白或酶的基因發生變異，影響蛋白的表達或酶的活性，從而增強或降低氯吡格雷的療效，使不同個體間的用量產生差異，這些遺傳因素包括CYP2C19、CYP2C9、IRS1、P2RY12、PON1、CES1等基因上的基因多態性位點。

氯吡格雷為前體藥，需經肝細胞色素P450酶系主要是CYP2C19和CYP2C9代謝生成活性代謝產物，發揮抗血小板療效。CYP2C19基因存在多態性，其酶有三種不同的代謝類型：快速代謝型（UM，*17/*17）、中間代謝型(IM，*1/*2,*1/*3,*17/*2,*17/*3）、慢代謝型(PM，*2/*2,*2/*3,*3/*3）。常規劑量的氯吡格雷，在慢代謝型患者中產生的活性代謝物減少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓風險增加；在快代謝型患者中產生活性代謝物增加，抑制血小板聚集作用增強。還有研究表明，基因型為CYP2C19*8與一個功能缺失等位基因*2，*3，*4，*5，*8或功能等位基因*1結合的個體相比于基因型為*1/*1的個體，對氯吡格雷的代謝活性弱，同時會降低活性藥物代謝物的形成，對氯吡格雷的反應較弱，發生心血管二次事件的風險較高。CYP2C9酶功能缺失的*2和*3突變，降低了氯吡格雷的體內代謝和抗血小板活性。

臨床中應用常規劑量的氯吡格雷，有部分患者不能達到預期的抗血小板的目的，導致不良心血管事件的發生，這種現象稱為氯吡格雷抵抗。IRS1rs13431554位點GG基因型與冠心病合并Ⅱ型糖尿病患者氯吡格雷抵抗的發生呈明顯相關性，GG基因型是冠心病合并Ⅱ型糖尿病患者氯吡格雷抵抗的獨立危險因素。PON-1是由肝臟合成的糖蛋白，在人體組織中廣泛分布。有研究發現，PON-1是氯吡格雷代謝物形成活性硫醇基的限速酶，PON-1基因的Q192多態性影響氯吡格雷活性代謝物的形成速率。近年來研究發現CES1是氯吡格雷轉化為活性代謝產物過程中又一種重要的酶，CES1的SNP位點G143E與氯吡格雷活性代謝物水平升高有關。冠心病并發Ⅱ型糖尿病患者中，IRS1基因多態性位點rs13431554GG型個體在接受氯吡格雷治療時，有較高的血小板反應性。P2RY12受體是氯吡格雷的作用靶點，在ADP誘導的血小板聚集中發揮重要的作用，P2RY12基因多態性位點rs6785930、rs3732759、rs2046934與氯吡格雷的反應性及發生不良心血管事件的風險相關。