[發明專利]一種用于檢測c-kit基因突變的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201810013646.1
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN108374044A
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發明（設計）人: 于世輝;胡昌明;黃曉強;周丹燕;毛琳琳;徐艷艷;海洋;周杏子;劉晶星;趙薇薇;趙強;袁海明;陳白雪;喻長順
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗集團股份有限公司;廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 梁順宜;郝傳鑫

本發明涉及一種用于檢測c?kit基因突變的引物組、試劑盒及方法，屬于生物檢測技術領域。本發明用于檢測c?kit基因突變的引物組包括用于檢測c?kit基因外顯子9的PCR擴增引物對、用于檢測c?kit基因外顯子11的PCR擴增引物對、用于檢測c?kit基因外顯子13的PCR擴增引物對和用于檢測c?kit基因外顯子17的PCR擴增引物對。本發明提供了一種新的用于檢測c?kit基因突變的引物組，其可用于檢測c?kit基因外顯子9、外顯子11、外顯子13和外顯子17的突變情況；采用該引物組檢測c?kit基因突變，特異性好、準確度高和靈敏度好，對低突變率的樣本也能準確檢出。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種用于檢測c－kit基因突變的引物組、試劑盒及方法。

背景技術

c-kit基因位于人類染色體4q11-q12，屬于第Ⅲ類酪氨酸激酶受體。研究表明，c-kit與其配體干細胞因子結合后發生二聚體化及自身磷酸化，進而激活下游信號通路，介導細胞生長、增殖，抑制細胞凋亡等。c-kit基因的突變將導致 c-Kit受體持續激活，引發細胞增殖失控及凋亡抑制。

胃腸間質瘤(GIST)是較常見的消化道間葉性腫瘤，研究表明，大多數GIST 是由c-Kit基因突變所致，在GIST中c-kit基因突變率約為90％。c-Kit基因突變主要發生在近膜區的外顯子11(約70％)，然后是外膜區的外顯子9(10–15％)，酪氨酸區段的外顯子13、17也可以發生突變(分別為1–3％)。另一方面，c-Kit 基因突變也發生于2-6％的黑色素瘤中，最常見于黏膜黑色素瘤(15-20％)及肢端雀斑樣黑色素瘤(10-20％)中。

伊馬替尼(Imatinib)/格列衛(Glivec)作為一種特殊的c-kit酪氨酸激酶抑制劑，經FDA批準已應用于c-kit突變、轉移性和手術難于切除病例的治療以及部分高度侵襲危險性病例的術后預防性化療。同時，有相關研究報道，伊馬替尼用于治療c-kit突變或擴增的晚期黑色素瘤患者能取得比較滿意的療效，《中國黑色素瘤診治指南(2011版)》指出，伊馬替尼可用于部分c-kit突變或擴增的晚期黑色素瘤患者的治療。

目前對c-kit基因突變的檢測方法主要有定量PCR、Sanger測序和DHPLC等，Sanger測序法被認為是檢測基因突變的金標準，但是其檢測靈敏度約為15-20％，如果標本中某一個位點是雜合的，其中一個等位基因的含量低于15～20％時，用Sanger測序法很難將其檢測出來。而腫瘤細胞中c-kit基因突變率是未知的，有些外顯子的突變率甚至低于10％。因此，急需提供一種靈敏度高、特異性好的c-kit基因突變檢測產品和方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供一種特異性好、準確度高和靈敏度高的用于檢測c-kit基因突變的引物組及方法。

與此相應，本發明還提供了含有上述引物組的試劑盒以及上述引物組在制備用于檢測c-kit基因突變的試劑盒中的應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種用于檢測c-kit基因突變的引物組，其包括用于檢測c-kit基因外顯子9的PCR擴增引物對、用于檢測c-kit 基因外顯子11的PCR擴增引物對、用于檢測c-kit基因外顯子13的PCR擴增引物對和用于檢測c-kit基因外顯子17的PCR擴增引物對；其中，所述用于檢測c-kit基因外顯子9的PCR擴增引物對包括如SEQID NO:1所示的上游引物和如SEQ ID NO:2所示的下游引物；所述用于檢測c-kit基因外顯子11的PCR擴增引物對包括如SEQ ID NO:3所示的上游引物和如SEQ ID NO:4所示的下游引物；所述用于檢測c-kit基因外顯子13的PCR擴增引物對包括如SEQ ID NO:5 所示的上游引物和如SEQ ID NO:6所示的下游引物；所述用于檢測c-kit基因外顯子17的PCR擴增引物對包括如SEQ ID NO:7所示的上游引物和如SEQ ID NO:8所示的下游引物。