[發明專利]一種茶葉中黃曲霉毒素的測定方法在審
| 申請號： | 201810012304.8 | 申請日： | 2018-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN108226355A | 公開（公告）日： | 2018-06-29 |
| 發明（設計）人： | 李軍明;殷建忠;鐘讀波;馮月梅;尚樂;卞家亭;胡麗;李向楠 | 申請（專利權）人： | 云南云測質量檢驗有限公司;昆明醫科大學 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 650000 云南省*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 黃曲霉毒素 標準溶液 樣品提取 茶葉 標準儲備液 串聯質譜法 固相萃取柱 乙腈提取液 標準系列 二級凈化 微孔濾膜 樣品測定 液相色譜 凈化 凈化柱 靈敏度 使用液 有機相 污染 檢測 | ||
1.一種茶葉中黃曲霉毒素的測定方法，所述方法包括樣品提取、樣品凈化、標準溶液測定、樣品測定和樣品中黃曲霉毒素含量計算的步驟，其特征在于，所述凈化步驟依次采用固相萃取柱和凈化柱進行二級凈化；所述標準溶液測定和樣品測定步驟中，先用甲醇溶液定容，再采用液相色譜-串聯質譜法檢測黃曲霉毒素的含量。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
(1)樣品提取：樣品采用乙腈提取，過濾后，得提取液；
(2)樣品凈化：提取液過固相萃取柱，洗脫后定容；再過凈化柱，洗脫后過濾，得待測液；
(3)標準溶液測定：取已知濃度的黃曲霉毒素標準使用液，過濾后，用液相色譜-串聯質譜儀進行測定；
(4)樣品測定：用液相色譜-串聯質譜儀進行測定；
(5)計算樣品中黃曲霉毒素的含量。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述黃曲霉毒素為B族黃曲霉毒素和/或G族黃曲霉毒素；
優選地，所述B族黃曲霉毒素為黃曲霉毒素B1和/或黃曲霉毒素B2；
優選地，所述G族黃曲霉毒素為黃曲霉毒素G1和/或黃曲霉毒素G2。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述樣品提取步驟具體包括：在樣品中加入乙腈，經旋渦混勻、超聲提取、離心后過濾，得到提取液；
優選地，所述旋渦混勻的時間為1-10min，優選為2-7min；
優選地，所述超聲提取的時間為16-30min，優選為18-24min；
優選地，所述離心的時間為8-16min，優選為10-12min；
優選地，所述過濾為用玻璃纖維濾紙進行過濾。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于，所述樣品凈化步驟包括：提取液過固相萃取柱，用乙腈洗脫、氮吹、PBS緩沖液定容后，過凈化柱、水淋洗、用乙腈洗脫、氮吹、甲醇溶液溶解后，過濾得待測液；
優選地，所述水淋洗后用乙腈洗脫為分兩次洗脫，然后收集洗脫液；
優選地，所述甲醇溶液中甲醇的體積分數為40-70％，優選為50-60％；
優選地，所述過濾得待測液為過孔徑為0.1-0.6μm的有機相濾膜，所述孔徑優選為0.2-0.5μm。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，所述標準溶液測定步驟包括：取濃度已知的黃曲霉毒素標準儲備液，用甲醇溶液定容、混勻后保存；使用時用甲醇溶液配制成不同濃度的黃曲霉毒素標準使用液，過濾后，用液相色譜-串聯質譜儀進行測定；
優選地，所述甲醇溶液中甲醇的體積分數為40-70％，優選為50-60％；
優選地，所述保存的溫度為2-8℃，保存時間為1-3個月；
優選地，所述過濾為過孔徑為0.1-0.6μm的有機相濾膜，所述孔徑優選為0.2-0.5μm。
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