[發明專利]一種用于動物原代細胞培養的消毒液及其制備方法

在審

• 申請號: 201810011300.8
• 申請日: 2018-01-05
• 公開（公告）號: CN108184890A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 王為民;韓寶瑜;張擁軍
• 申請（專利權）人: 中國計量大學
• 主分類號: A01N47/44
• 分類號: A01N47/44;A01N43/90;A01N43/16;A01P1/00;A01P3/00
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發明屬于動物細胞工程技術領域，具體涉及一種用于動物體外細胞培養的消毒液及其制備方法，所述復配消毒劑主要包括組分：青霉素、硫酸鏈霉素、硫酸慶大霉素、兩性霉素B，本發明的復配消毒劑能在不影響細胞存活的條件下，具有廣泛的抗菌譜，能夠同時抑制大部分革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌和霉菌的生長，實現高效的動物細胞原代培養組織樣本消毒以及預防細胞傳代過程的微生物污染。

技術領域

本發明屬于動物細胞工程技術領域，具體涉及一種用于動物細胞體外培養的消毒液及其制備方法。

背景技術

動物細胞原代培養是從供體取得組織細胞后在體外進行的首次培養。分為腫瘤細胞原代培養與非腫瘤細胞原代培養(包括已分化的普通細胞培養和未分化的干細胞培養)。原代培養獲取的細胞具有二倍體遺傳性，接近和反映體內生長特性，可以直接觀察活細胞的形態結構、生命活動及其變化；提供大量生物性狀相似的試驗對象，原代細胞培養作為一種研究手段在藥物敏感性試驗、細胞分化、基因功能和調控機制等領域獲得了廣泛的應用。

按照培養對象的結構成分不同，將其分為組織培養、細胞培養及器官培養等。根據細胞是否在支持物上生長，將其分為貼壁型和懸浮型。在動物細胞培養過程中需要根據離體細胞的特點，需要提供適宜的溫度、CO₂分壓、pH、滲透壓和營養條件，以維持其在體外生長、增殖。哺乳動物細胞培養的溫度通常控制在37℃，魚類的溫度控制約在26℃。溫度過高或過低時，均不利于細胞生長甚至會導致細胞死亡。動物細胞最適宜pH一般控制在7.2～7.4，在此范圍細胞生長活躍，增殖速度快，如果過低或過高性，細胞會因為細胞膜受損而死亡。細胞培養液中需含有細胞增殖、生長所需要的各種營養物質。能夠提供細胞生長所需的能量物質(N源、C源)、代謝調節控制的物質(無機鹽、維生素、激素)，以及所需要的pH和滲透壓環境。

由于細胞培養基營養豐富，細胞在體外無抵抗微生物的能力，導致微生物易于在細胞培養體系中進行增殖，并產生多種有毒的代謝產物，如酶、抗原及毒素等，導致細胞培養基的成分、pH和滲透壓等細胞生存所必需的體外環境發生改變，對細胞的生存產生毒害作用。細胞作為一個生物體，亦會對培養環境中的污染物作出相應的反應，造成培養細胞生物學特性改變，從而影響實驗結果的準確性。因此保持細胞培養環境無微生物污染是進行細胞培養成功的必要條件。

動物原代細胞培養時，首先需要從動物體內提取目標組織樣本進行體外培養。不同來源的樣本受微生物污染的情況差別較大，例如來源于哺乳動物消化道和呼吸道等對外開放的器官，以及來源于淡水或海洋中的軟體動物如貝類等，目標組織直接暴露于環境中，污染的微生物種類有多種。雖然有些目標組織雖然本身是無菌的，如哺乳動物的肝臟、心臟和肌肉組織，但由于大部分取樣動物通常是處于帶菌狀態，嚴格的器械消毒和無菌操作有助于減少微生物污染的概率，但不能夠完全避免微生物的污染。動物原代培養細胞只有在無菌環境生長才能夠生長良好，為了成功進行細胞的體外原代培養，通常需要對目標組織塊進行消毒處理。

微生物的污染通常包括細菌、霉菌、支原體和病毒。在體外細胞培養的過程中，最常見的微生物污染是細菌和霉菌。目前在動物細胞原代培養組織樣本的取樣過程中，需要用不同的消毒劑對其進行消毒處理，以防止微生物的污染。

目前現有的消毒液包括化學消毒劑和抗生素等2大類，其中常見的化學消毒劑包括：70％乙醇溶液、8％NaCIO、15％甲酚皂、0.1％HgCI₂、1％過氧乙酸等。常用的抗生素有：雙抗(青霉素、硫酸鏈霉素)，硫酸慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、制霉菌素和兩性霉素B等。