[發明專利]標簽及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810010426.3
• 申請日: 2018-01-05
• 公開（公告）號: CN108165620B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 糜慶豐;朱鵬遠;吳春求;黃銓飛;潘兆東;王楊;周幸芝;劉麗菲
• 申請（專利權）人: 東莞博奧木華基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12N15/10;C12N15/11;C40B50/06;C12Q1/6883;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.制備標簽的方法，包括以下步驟：

(1)生成長度閾值范圍8～10bp內的所有核苷酸序列，構成候選標簽池；

(2)對候選標簽池內的核苷酸序列進行篩選，篩選標準如下：

去除3’末端不為C的核苷酸序列；

去除5’首端為C的核苷酸序列；

去除包含AGC、GCC、AAG、CTGC、CCG、CAA、AAA、TTT、CCC、GGG的核苷酸序列；

去除5’端是AGG起始的核苷酸序列；

去除3’端是CC終止的核苷酸序列；

(3)對篩選后的候選標簽池內的核苷酸序列進行兩兩序列比對，去除差異位置小于2的任一序列；

(4)將候選標簽池內的核苷酸序列插入標簽接頭3’末端“GAT”的上游，去除使標簽接頭出現二聚體和發夾結構的核苷酸序列；

(5)任選候選標簽池內的核苷酸序列進行試驗篩選，篩選測序數據量占平均數據量的比例大于25％比例閾值的核苷酸序列，作為標簽。

2.標簽組，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO：004～SEQ ID NO：387所示的384個標簽。

3.權利要求2所述的標簽組用于構建Ion torrent測序文庫的用途，其特征在于：所述標簽插入標簽接頭3’末端“GAT”的上游。

4.根據權利要求3所述的用途，其特征在于：所述標簽接頭3’末端“GAT”下游還插入通用序列，所述通用序列為5’-AAATGGGCGGTAGGCTTG-3’。

5.標簽接頭組，所述標簽接頭組包括384種所含標簽序列不同的標簽接頭，所述384種標簽接頭中分別包含的標簽序列依次為SEQ ID NO：004～SEQ ID NO：387所示的序列，且所述標簽序列插入所述標簽接頭3’末端“GAT”的上游。

6.根據權利要求5所述的標簽接頭組，其特征在于：所述標簽接頭3’末端“GAT”下游還插入通用序列，所述通用序列為5’-AAATGGGCGGTAGGCTTG-3’。

7.基于DNA標簽文庫的基因測序方法，所述方法用于非疾病診斷目的，包括：

(1)提取樣品基因組DNA；

(2)利用權利要求5所述的標簽接頭組，不同樣品來源的基因組DNA利用包含不同標簽序列的標簽接頭進行DNA標簽文庫構建；

(3)將不同樣品來源的DNA標簽文庫混合，經磁珠純化、質量控制后，獲得混合DNA標簽文庫；

(4)使用Ion torrent平臺對混合DNA標簽文庫進行測序。