[發明專利]一種硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法

在審

• 申請號: 201810006873.1
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN108220265A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 朱圣柯;朱彤
• 申請（專利權）人: 上海青瑞食品科技有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于：在產谷氨酰胺轉氨酶的菌株培養過程中添加含硒物質。

2.根據權利要求1所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，所述產谷氨酰胺轉氨酶的菌株包括茂原鏈輪絲菌、吸水鏈霉菌和經過基因工程改造的細菌、放線菌、霉菌和酵母。

3.根據權利要求2所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，所述產谷氨酰胺轉氨酶的菌株是茂原鏈輪絲菌和吸水鏈霉菌。

4.根據權利要求1所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，所述含硒物質包括富硒酵母、淀粉-硒納米顆粒、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和亞硒酸鈉。

5.根據權利要求1-4任一所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，以所述產谷氨酰胺轉氨酶的菌株為出發菌株，依次經過(1)試管斜面種子培養階段、(2)平皿培養階段、(3)種子搖瓶培養階段、(4)種子罐培養基階段和(5)發酵罐培養階段，在所述(1)～(5)中至少一個階段中添加含硒物質。

6.根據權利要求5所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，在所述(1)中，將經過活化、篩選的產谷氨酰胺轉氨酶的菌株的單菌落接種在斜面種子培養基上，30-40℃培養40-56h,獲得培養成熟的試管斜面種子，在所述斜面種子培養基中添加5～20mg/L的亞硒酸鈉或者用淀粉-硒納米顆粒代替淀粉，所述斜面種子培養基是高氏一號培養基或經過改良的高氏一號培養基。

7.根據權利要求5所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，在所述(2)中，將所述培養成熟的試管斜面種子經劃線分離培養，挑選單菌落形成孢子懸浮液，將所述孢子懸浮液接種平皿培養基上，30-40℃培養40-48h，獲得菌苔，在所述平皿培養基中添加5g/L的富硒酵母代替5g/L的淀粉，所述平皿培養基是高氏一號培養基或經過改良的高氏一號培養基。

8.根據權利要求5所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，在所述(3)中，將所述菌苔搖勻打碎，接種到種子搖瓶培養基中，在30-40℃、200-300r/min條件下培養36-44h,獲得搖瓶種子液，在所述種子搖瓶培養基中添加5～20mg/L的亞硒酸鈉，或者用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏，或者用淀粉-硒納米顆粒代替淀粉，所述種子搖瓶培養基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄，調節pH至7.0。

9.根據權利要求5所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，在所述(4)中，將所述搖瓶種子液接種到種子罐培養基中，在30-40℃、200-300r/min條件下培養18-40h,得到種子罐種子液，所述種子罐培養基中用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏，同時用淀粉-硒納米顆粒代替淀粉，所述種子罐培養基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄，調節pH至7.0。

10.根據權利要求5所述的硒修飾谷氨酰胺轉氨酶的制備方法，其特征在于，在所述(5)中，選取所述(4)中培養18-20h、菌球均勻，菌數大于等于10⁴個/ml的種子罐種子液，以10～15％接種量接種在發酵培養基中，在28～40℃，攪拌速度230-300r/min下發酵培養50～70h，得到發酵液，所述發酵液經提取、純化、精制和凍干，得到酶粉，所述發酵罐培養中流量添加1L/m³的硒代半胱氨酸或硒代蛋氨酸，或者在所述發酵罐培養基中用富硒酵母代替蛋白胨和酵母膏同時用淀粉-硒納米顆粒代替淀粉，所述發酵罐培養基包括20g/L的蛋白胨、25g/L的淀粉、2g/L的酵母膏、2g/L的MgSO₄、2g/L的K₂HPO₄、2g/L的KH₂PO₄、占所述發酵罐培養基體積0.01％的PPE消泡劑、占所述發酵罐培養基質量分數0.01％的聚甘油醚，調節pH至7.0。