[發(fā)明專利]用于在細(xì)胞區(qū)室中正交接近和標(biāo)簽化生物分子的分析系統(tǒng)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780087116.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN110431237A
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·蘭吉;F·J·斯特梅斯;L·克里斯琴森;D·K·波霍洛克;F·張
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伊魯米納公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6804
• 分類號(hào): C12Q1/6804;C12N15/10
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 陳文平;袁元

1.一種使細(xì)胞核信息分子與分析性生物分子反應(yīng)的方法，其包括使所述細(xì)胞核與核通透性增強(qiáng)劑接觸并使所述信息分子與所述分析性生物分子反應(yīng)。

2.一種分析細(xì)胞核信息分子的方法，其包括：

(a)使包含細(xì)胞核信息分子的細(xì)胞核與核通透性增強(qiáng)劑和分析性生物分子接觸；

(b)使所述分析性生物分子與所述細(xì)胞核信息分子反應(yīng)以提供分析復(fù)合物；和

(c)分析所述分析復(fù)合物，從而檢測(cè)所述細(xì)胞核信息分子。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中鄰接保持元件包含所述細(xì)胞核。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3或25中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述細(xì)胞核信息分子是DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其混合物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述細(xì)胞核信息分子是DNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分析性生物分子是轉(zhuǎn)座酶或轉(zhuǎn)座體復(fù)合物、或抗體、或寡核苷酸、或核苷酸、或逆轉(zhuǎn)錄引物、或酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述寡核苷酸或核苷酸包含至少一種標(biāo)記的核苷酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述酶是擴(kuò)增酶、聚合酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶、PCR酶、連接酶、Taq DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶、介導(dǎo)體外轉(zhuǎn)錄的酶、整合酶或切口酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述分析性生物分子是轉(zhuǎn)座體復(fù)合物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中各轉(zhuǎn)座體復(fù)合物包含轉(zhuǎn)座酶和兩個(gè)包含轉(zhuǎn)座子末端序列的轉(zhuǎn)座子末端組合物。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述細(xì)胞核信息分子是靶核酸，其中所述反應(yīng)包括將所述靶核酸片段化成雙鏈核酸片段，和用來(lái)自所述轉(zhuǎn)座子末端組合物的轉(zhuǎn)移鏈標(biāo)簽化以形成標(biāo)簽化分析復(fù)合物。

12.一種從細(xì)胞核靶核酸制備標(biāo)簽化核酸片段的文庫(kù)的方法：

(a)提供包含單個(gè)核的鄰接保持元件，其中所述單個(gè)核包含靶核酸；

(b)使所述鄰接保持元件和單個(gè)核與核通透性增強(qiáng)劑和分析性生物分子接觸；和

(c)使所述分析性生物分子與所述細(xì)胞核信息分子反應(yīng)以提供分析復(fù)合物；和

(d)分析所述分析復(fù)合物，從而檢測(cè)所述細(xì)胞核信息分子。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括在接觸之前，在存在核孔阻斷劑和不存在核通透性增強(qiáng)劑的情況下使細(xì)胞質(zhì)信息分子與第二分析性生物分子反應(yīng)，其中方法反應(yīng)步驟將第一標(biāo)簽引入所述細(xì)胞質(zhì)信息分子，并且將第二標(biāo)簽引入所述細(xì)胞核信息分子。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中至少一種信息分子是蛋白質(zhì)。

15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括通過(guò)使所述細(xì)胞與第二分析性生物分子接觸來(lái)分析細(xì)胞質(zhì)信息分子，使所述第二分析性生物分子與所述細(xì)胞質(zhì)信息分子反應(yīng)以提供第二分析復(fù)合物，和任選地，分析所述第二分析復(fù)合物，從而檢測(cè)所述細(xì)胞質(zhì)信息分子。

16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述分析性生物分子是轉(zhuǎn)座體復(fù)合物，并且所述方法還包括用聚合酶處理所述分析復(fù)合物，其中所述聚合酶任選地是鏈置換聚合酶。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中分析包括對(duì)片段化和標(biāo)簽化核酸或其擴(kuò)增子或其拷貝進(jìn)行測(cè)序。