[發(fā)明專利]使用熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780086455.1
• 申請(qǐng)日: 2017-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN110381746A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·F·克拉米爾;M·A·B·科爾克曼;馬臻;M·謝弗斯;S·希普夫斯科夫;M·范布魯塞爾-茲維內(nèi);S·于
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杜邦營養(yǎng)生物科學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): A23J3/32
• 分類號(hào): A23J3/32;C12P7/06;C12P7/64;C12C7/00;C12N9/52
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 凌立;黃革生

1.一種用于生產(chǎn)熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶的方法，所述方法包括：

(a)用編碼與SEQ ID NO:3、8或10具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶的重組構(gòu)建體轉(zhuǎn)化生產(chǎn)宿主；以及

(b)在37.5℃以上的溫度下培養(yǎng)步驟(a)的生產(chǎn)宿主，以提高所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶的表達(dá)水平。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中任選地從所述生產(chǎn)宿主回收所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶。

3.一種含有熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶的培養(yǎng)物上清液，所述培養(yǎng)物上清液通過權(quán)利要求1或2所述的方法獲得。

4.一種飼料、喂養(yǎng)料、飼料添加劑組合物、預(yù)混物、食物或谷物產(chǎn)品，其包含與SEQ IDNO:3、8或10具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶，其中所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶可以單獨(dú)使用或與至少一種直接飼喂微生物組合使用。

5.一種動(dòng)物飼料，其包含與SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶，其中所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶以從1-20g/噸飼料的量存在，并且進(jìn)一步其中所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶可以單獨(dú)使用或與至少一種直接飼喂微生物組合使用。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飼料添加劑組合物，用于在動(dòng)物飼料中使用，所述飼料添加劑組合物進(jìn)一步包含10和至少一種選自以下的組分：蛋白質(zhì)、肽、蔗糖、乳糖、山梨糖醇、甘油、丙二醇、氯化鈉、硫酸鈉、乙酸鈉、檸檬酸鈉、甲酸鈉、山梨酸鈉、氯化鉀、硫酸鉀、乙酸鉀、檸檬酸鉀、甲酸鉀、乙酸鉀、山梨酸鉀、氯化鎂、硫酸鎂、乙酸鎂、檸檬酸鎂、甲酸鎂、山梨酸鎂、焦亞硫酸鈉、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯。

7.一種用于在動(dòng)物飼料中使用的顆粒狀飼料添加劑組合物，其包含與SEQ ID NO:3、8或10具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶，所述熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶可以單獨(dú)使用或與至少一種直接飼喂微生物組合使用，其中所述顆粒狀飼料添加劑組合物包含通過選自以下的方法產(chǎn)生的顆粒：高剪切制粒、鼓式制粒、擠出、滾圓、流化床附聚、流化床噴涂、噴霧干燥、冷凍干燥、造粒、噴霧冷卻、旋轉(zhuǎn)式圓盤霧化、凝聚、壓片或上述方法的任何組合。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的顆粒狀飼料添加劑組合物，其中所述顆粒的平均直徑大于50微米并且小于2000微米。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的飼料添加劑組合物，其中所述組合物呈液體形式。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的飼料添加劑組合物，其中所述組合物呈適合于在飼料丸粒上噴霧干燥的液體形式。

11.一種用于水解含淀粉材料的方法，所述方法包括：

(a)使含淀粉材料與液體接觸以形成醪液；以及

(b)通過使醪液與酶混合物接觸而水解醪液中的淀粉以形成液化物，所述酶混合物包含與SEQ ID NO:3、8或10具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述酶混合物進(jìn)一步包含至少一種選自以下的酶：α-淀粉酶、淀粉葡糖苷酶、肌醇六磷酸酶、支鏈淀粉酶、β-葡聚糖酶、纖維素酶和木聚糖酶。

13.一種用于從含淀粉材料生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物的方法，所述方法包括：

(a)用酶混合物液化所述含淀粉材料，所述酶混合物包含與SEQ ID NO:3、8或10具有至少80％序列同一性的熱穩(wěn)定絲氨酸蛋白酶；

(b)糖化步驟(a)的產(chǎn)物；

(c)用合適的生物體進(jìn)行發(fā)酵；以及

(d)任選地，回收步驟(c)中產(chǎn)生的產(chǎn)物。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，同時(shí)進(jìn)行步驟(b)和(c)。