[發明專利]耐熱逆轉錄酶突變體

有效

• 申請號: 201780086415.7
• 申請日: 2017-12-13
• 公開（公告）號: CN110291196B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 石川一彥;上森隆司;高津成彰
• 申請（專利權）人: 寶生物工程株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/12
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;黃登高

1.一種莫洛尼鼠白血病病毒MMLV逆轉錄酶突變體，其氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1相比僅在對應于SEQ?ID?NO:1的第55位的位置將蘇氨酸突變為甘氨酸，其中所述氨基酸位置的編號自由起始密碼子編碼的甲硫氨酸之后的第一個蘇氨酸開始。

2.一種莫洛尼鼠白血病病毒MMLV逆轉錄酶突變體，其氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1相比僅進行選自以下(1)-(15)的氨基酸置換：

(1)T55G和A54P，

(2)T55G和T287K，

(3)T55G和Q291K，

(4)T55G和T306K，

(5)T55G和D524A，

(6)T55G和D524N，

(7)T55G、H204R、M289L、T306K和F309N，

(8)T55G、D209P和I212A，

(9)T55G、A54P和T287K，

(10)T55G、A54P、H204R、M289L、T306K和F309N，

(11)T55G、A54P和Q291K，

(12)T55G、A54P和D524N，

(13)T55G、A54P和D524A，

(14)T55G、A54P和T306K，和

(15)T55G、A54P、D209P和I212A，

其中所述氨基酸位置的編號自由起始密碼子編碼的甲硫氨酸之后的第一個蘇氨酸開始。

3.根據權利要求1-2中任何一項所述的逆轉錄酶突變體，其缺少核糖核酸酶H活性。

4.一種編碼根據權利要求1-3中任何一項所述的逆轉錄酶突變體的核酸。

5.一種表達載體，其包含根據權利要求4所述的核酸和表達調控序列。

6.一種用根據權利要求5所述的表達載體轉化的細胞，其表達逆轉錄酶突變體。

7.一種用于產生根據權利要求4所述的編碼逆轉錄酶突變體的核酸的方法，所述方法包括以下步驟：在編碼SEQ?ID?NO:1所示的MMLV逆轉錄酶的核酸中，在所述突變體對應位置發生密碼子置換。

8.一種用于產生根據權利要求1-3中任一項所述逆轉錄酶突變體的方法，所述方法包括以下步驟：在SEQ?ID?NO:1所示的MMLV逆轉錄酶中，在所述突變體對應位置發生氨基酸置換。

9.一種用于合成cDNA的方法，所述方法包括使用根據權利要求1-3中任何一項所述的逆轉錄酶突變體合成與模板RNA互補的DNA的步驟。

10.根據權利要求9所述的方法，其進一步包括擴增所述cDNA的步驟。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述cDNA的擴增通過等溫擴增反應或PCR進行。

12.一種組合物，其含有根據權利要求1-3中任何一項所述的逆轉錄酶突變體。

13.一種試劑盒，其包含根據權利要求1-3中任何一項所述的逆轉錄酶突變體。

14.一種用于增加莫洛尼鼠白血病病毒MMLV逆轉錄酶的耐熱性的方法，所述方法包括以下步驟：在編碼SEQ?ID?NO:1所示的MMLV逆轉錄酶的核酸中，發生根據權利要求7所述的密碼子置換。