[發明專利]蛋白酶傳感器分子

在審

• 申請號: 201780082959.6
• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN110494569A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: H·戴克斯;S·C·特羅威爾
• 申請（專利權）人: 聯邦科學技術研究組織
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12N13/00;G01N33/52;G01N21/76
• 代理公司: 72002 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 左路;區斌<國際申請>=PCT/AU20

1.一種假單胞菌屬某些種蛋白酶傳感器分子，其包含具有選自由KQ、SF、FM、KK、KN、NQ、NT、EI、QQ及其組合組成的組的至少一個假單胞菌屬某些種蛋白酶切割位點的靶序列，并且包含下列特征中的一種或多種：

(i)所述靶序列的長度小于約50個氨基酸；

(ii)可檢測標記；和/或

(iii)兩個或更多個所述蛋白酶切割位點；

其中通過假單胞菌屬某些種蛋白酶切割所述靶序列產生可檢測的變化。

2.如權利要求1所述的傳感器，其中所述靶序列包含三個、四個、五個、六個或七個蛋白酶切割位點。

3.如權利要求1或權利要求2所述的傳感器，其中所述靶序列至少包含SFM(SEQ ID NO:37)、SKMXXPP其中X是任何氨基酸(SEQ ID NO:40)和/或KKNQ(SEQ ID NO:24)。

4.如權利要求1或權利要求2所述的傳感器，其中所述靶序列包含選自以下的氨基酸序列：

SFMKKNQNTEI(SEQ ID NO:45)；

SFMNQNTEI(SEQ ID NO:57)；

LSFMAIP(SEQ ID NO:70)；

LQGSFMKKNQNTEIGSFE(SEQ ID NO:72)；

LQGSFMNQNTEIGSFE(SEQ ID NO:73)；

LQGSLSFMAIPGSFE(SEQ ID NO:74)；和

LQGSKQKQKQKQGSFE(SEQ ID NO:112)。

5.如權利要求1至4中任一項所述的傳感器，其中所述靶序列包含在N-末端和/或C-末端處附接到可檢測標記的氨基酸接頭。

6.如權利要求1至5中任一項所述的傳感器，其中所述可檢測的變化是共振能量轉移、聲學、電化學電位、熒光、化學發光、磷光、吸光度、抗體結合、BRET比率、FRET效率或質量的變化。

7.如權利要求1至6中任一項所述的傳感器，其中所述可檢測標記選自由以下組成的組：發色團、納米粒子、量子點、紫精及其組合。

8.如權利要求1至7中任一項所述的傳感器，其中通過假單胞菌屬某些種蛋白酶切割所述靶序列導致共振能量轉移(RET)的可檢測的變化。

9.如權利要求1至8中任一項所述的傳感器，其中所述可檢測標記包含兩種或更多種組分。

10.如權利要求9所述的傳感器，其中所述可檢測標記包含

i)共價附接到所述靶序列的化學發光供體結構域和受體結構域，或

ii)熒光團結構域和受體結構域。

11.如權利要求10所述的傳感器，其中一個結構域共價附接到所述靶序列的N-末端，并且另一個結構域共價附接到所述靶序列的C-末端。

12.如權利要求10或權利要求11所述的傳感器，其中

所述受體結構域是綠色熒光蛋白(GFP)、Venus、mOrange，或者它們中任一者的生物活性變體或片段；

所述化學發光供體結構域是熒光素酶或者生物活性變體或片段；并且

所述靶序列包含SFMKKNQNTEI(SEQ ID NO:45)、SFMNQNTEI(SEQ ID NO:57)或LSFMAIP(SEQ ID NO:70)。

13.如權利要求1至12中任一項所述的傳感器，所述傳感器

i)對于假單胞菌屬某些種蛋白酶的EC₅₀介于0.1nM與10nM之間、或介于0.1nM與100nM之間，并且/或者

ii)對假單胞菌屬某些種蛋白酶的靈敏度是對牛纖溶酶的靈敏度的至少20倍、或至少100倍。