[發(fā)明專利]生物體選擇性生長培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780078646.3
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN110177867A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發(fā)明（設計）人: V·馬思;D·格羅夫普賴斯
• 申請（專利權）人: 綠洲科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王健

本發(fā)明涉及用于分離產毒霍亂弧菌的選擇性和/或差異生長培養(yǎng)基，以及用于從樣品中分離和/或鑒定和/或選擇性生長產毒霍亂弧菌的方法。

技術領域

本發(fā)明涉及用于分離產毒霍亂弧菌(Vibrio cholerae)的選擇性和/或差異生長培養(yǎng)基，以及用于從樣品中分離和/或鑒定和/或選擇性生長產毒霍亂弧菌的方法。

簡介

霍亂弧菌是弧菌科(Vibrionaceae)的成員之一，且是兼性厭氧的革蘭氏陰性細菌。大多數弧菌菌種在河口和海洋環(huán)境中普遍存在，盡管已經在淡水中鑒定出弧菌，但前提是存在一定的最低水平的鈉離子¹。

特別重要的是，攝入被霍亂弧菌的某些菌株污染的水或食物會導致霍亂，霍亂會引起急性腹瀉，且如果不加以治療可在數小時內導致死亡。據研究人員估計，全世界每年有140萬至430萬病例，且有28000至142000人死于霍亂²。提供安全的飲用水和環(huán)境衛(wèi)生對于預防這種極端致命的疾病的傳播是至關重要的。

基于霍亂弧菌的脂多糖(LPS)的O抗原可以從血清學上對霍亂弧菌進行分類。事實上，根據O抗原的抗原性，在水生環(huán)境中存在多于兩百種霍亂弧菌的血清群，鑒定為霍亂弧菌O1至O200。然而，在這兩百種不同的血清型中，只有O1和O139菌株亞群是致病的³。此外，致病的O1血清群被細分為兩種表型不同的生物型，埃爾托型和古典型。這兩種生物型可進一步被細分為兩種血清型，稻葉型和小川型。這些血清型在凝集和殺弧菌抗體測試中基于它們主要的耐熱性LPS菌體抗原被區(qū)分。霍亂菌群具有共同的抗原A，而血清型由類型特異性抗原來區(qū)分，B為小川型且C為稻葉型。普遍認為O139源自埃爾托生物型，但失去了特性O1菌體抗原，同時獲得了產生多糖莢膜的能力⁴。

在1992年以前，人們認為霍亂僅由稻葉型和小川型引起，但在1992年，由O139引起的霍亂在印度和孟加拉國以流行的比例出現(xiàn)。然而，盡管由O139血清群引起的疾病是毀滅性的，但埃爾托型菌株仍然是全球主導的菌株³。霍亂弧菌的其它血清群可以引起腹瀉疾病和其它病理學，但與流行性霍亂無關。

船舶收集壓載水以調節(jié)其穩(wěn)定性。然而，港口處壓載水的排放已經成為在世界范圍內對人類健康有明顯影響的大量非本地和不期望的生物體(諸如霍亂弧菌)的地理遷移的原因。正是這樣的經歷史證明的風險促使國際海事組織(IMO)在2004年2月14日通過了《船舶壓載水和沉積物控制和管理國際公約(International Convention for theControl and Management of Ships'Ballast Water and Sediments)(BWM)》。BWM旨在通過建立用于管理和控制船舶壓載水和沉積物的標準和程序，來防止病原生物體從一個地區(qū)傳播到另一個地區(qū)。特別地，公約的規(guī)則D-2建立了特定微生物的數值表示的壓載水排放標準。對于產毒霍亂弧菌(O1及O139)，該限值為少于每100毫升1個菌落形成單位(cfu)或少于每1克(濕重)浮游動物樣品1cfu⁵。在船舶的整個使用過程中都需要遵守。此外，通常測試不能在船上進行，而是需要將樣品送到實驗室。在較偏遠的地區(qū)，這可能特別困難。此外，實驗室測試通常很慢，迫使船舶在港口長期停留，造成嚴重的航運中斷，耗費驚人的成本。

因此，需要一種簡單而有效的測試，其能夠快速檢測壓載水中的非常小的量(<1CFU/ml或<1CFU/g)的具體地產毒O1或O139霍亂弧菌。

一旦致病霍亂弧菌在港口被釋放，它便可通過糞口途徑迅速傳播，特別是在衛(wèi)生條件差的地區(qū)。在這一點上，快速的細菌學診斷對預防潛在的流行性暴發(fā)至關重要。同樣，需要一種能夠特定地鑒定患者群體中的致病霍亂弧菌的快速診斷測試。