[發明專利]用于血紅蛋白β和鐮狀血紅蛋白β的質譜標準及其用途

在審

• 申請號: 201780078496.6
• 申請日: 2017-12-19
• 公開（公告）號: CN110100181A
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 威廉·J·普拉切克;馬修·B·倫弗羅;蒂姆·M·湯斯;羅伯特·H·惠特克
• 申請（專利權）人: UAB研究基金會
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/72;G01N30/02;G01N33/96
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.一種評價經基因修飾的溶血產物樣品中鐮狀細胞突變的矯正水平的方法，其包括：

(a)將所述樣品與胰蛋白酶一起溫育以獲得血紅蛋白片段，其中所述血紅蛋白片段包含HBB和HBS肽；

(b)通過液相色譜法對經胰蛋白酶處理的樣品中的HBB和HBS肽與其它組分進行色譜分離；并且

(c)通過質譜法分析經色譜分離的HBB和HBS肽以確定所述溶血產物樣品中的HBB/HBS比率，其中所述HBB/HBS比率是通過比較步驟(c)的質譜結果與標準曲線來確定的，所述標準曲線是由已知比率的包含SEQ ID NO:1(VHLTPEEKS)的合成HBB肽與包含SEQ ID NO:2(VHLTPVEKS)的合成HBS肽的胰蛋白酶消化物的質譜結果生成的。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述標準曲線通過以下步驟生成：

(a)制備一系列標準溶液，其中所述系列的標準溶液的成員含有不同的已知比率的包含SEQ ID NO:1(VHLTPEEKS)的合成HBB肽和包含SEQ ID NO:2(VHLTPVEKS)的合成HBS肽；

(b)將步驟(a)的標準溶液與胰蛋白酶一起溫育；

(c)通過液相色譜法對經溫育的標準溶液中的合成HBB肽和合成HBS肽與其它組分進行色譜分離；

(d)針對每份標準溶液通過質譜法分析經色譜分離的合成HBB肽和合成HBS肽；

(e)針對每份標準溶液確定所述合成HBB肽和合成HBS肽的質譜峰體積；以及

(f)生成標準曲線。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述系列的標準溶液包含：含有100:0的合成HBB/合成HBS比率的第一溶液，含有90:10的合成HBB/合成HBS比率的第二溶液，含有80:20的合成HBB/合成HBS比率的第三溶液，含有70:30的合成HBB/合成HBS比率的第四溶液，含有60:40的合成HBB/合成HBS比率的第五溶液，含有50:50的合成HBB/合成HBS比率的第六溶液，含有40:60的合成HBB/合成HBS比率的第七溶液，含有30:70的合成HBB/合成HBS比率的第八溶液，含有20:80的合成HBB/合成HBS比率的第九溶液，含有10:90的合成HBB/合成HBS比率的第十溶液，和含有0:100的合成HBB/合成HBS比率的第十一溶液。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述溶血產物樣品獲自來自于包含所述基因修飾的受試者的血漿樣品。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述溶血產物樣品獲自來自于包含所述基因修飾的受試者的紅細胞群。

6.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述紅細胞分化自經基因修飾的造血干細胞或誘導性多能干細胞，其中已經處理了所述細胞以矯正編碼血紅蛋白的基因組序列中的鐮狀細胞突變。

7.一種確定包含多個經基因修飾的造血干細胞的造血干細胞群是否會有效減輕受試者中鐮狀細胞疾病的一種或多種癥狀的方法，所述經基因修飾的造血干細胞在編碼血紅蛋白的基因組序列上具有經矯正的鐮狀細胞突變，所述方法包括：

(a)使所述造血干細胞群的第一亞群分化成紅細胞；

(b)保存所述造血干細胞群的第二亞群；

(c)由所述紅細胞獲得溶血產物樣品；

(d)將所述溶血產物樣品與胰蛋白酶一起溫育；

(e)通過液相色譜法對經胰蛋白酶處理的樣品中的HBB和HBS肽與其它組分進行色譜分離；

(f)通過質譜法分析經色譜分離的HBB和HBS肽；以及

(g)確定所述溶血產物樣品中的HBB/HBS比率，其中約30％或更高的HBB/HBS比率指示所述保存的造血干細胞亞群在減輕所述受試者中鐮狀細胞疾病的一種或多種癥狀方面將是有效的。