[發(fā)明專利]核堿基編輯器的AAV遞送在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201780076474.6 | 申請(qǐng)日： | 2017-10-13 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110214180A | 公開（公告）日： | 2019-09-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | D.R.劉;J.M.萊維;W.H.葉 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 哈佛大學(xué)的校長及成員們 |
| 主分類號(hào)： | C12N7/00 | 分類號(hào)： | C12N7/00;C12N15/864;C12N9/22;C12N5/10;A61K48/00;C12N15/10;C12N15/79 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105 | 代理人： | 張曉飛 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 美國;US |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 編輯器 核堿基 蛋白 內(nèi)含肽 遞送 分裂 重組腺相關(guān)病毒 剪接 重組AAV載體 內(nèi)含肽介導(dǎo) 共表達(dá) 蛋白質(zhì) 細(xì)胞 融合 | ||
1.組合物，其包含：
(i)第一核苷酸序列，其編碼在C-末端與內(nèi)含肽-N融合的Cas9蛋白的N-末端部分；和
(ii)第二核苷酸序列，其編碼與所述Cas9蛋白的C-末端部分的N-末端融合的內(nèi)含肽-C，
其中所述第一核苷酸序列或第二核苷酸序列與編碼至少一個(gè)二分核定位信號(hào)的核苷酸序列可操作地連接。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述Cas9蛋白的N-末端部分包含對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的氨基酸1-573或1-637的SEQ ID NO:1-275和394-397的任一個(gè)的部分。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的組合物，其中所述Cas9蛋白的C-末端部分包含對(duì)應(yīng)于SEQID NO:1的氨基酸574-1368或638-1368的SEQ ID NO:1-275和394-397的任一個(gè)的部分。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的組合物，其中所述內(nèi)含肽-N包含如SEQ ID NO:350-351和354-355的任一個(gè)中所示的氨基酸序列。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的組合物，其中所述內(nèi)含肽-C包含如SEQ ID NO:352-353和356-357的任一個(gè)中所示的氨基酸序列。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列進(jìn)一步包含與啟動(dòng)子可操作地連接的編碼指導(dǎo)RNA(gRNA)的核苷酸。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列進(jìn)一步包含轉(zhuǎn)錄終止子。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄終止子是來自bGH基因、hGH基因或SV40基因的轉(zhuǎn)錄終止子。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述轉(zhuǎn)錄終止子是來自bGH基因的轉(zhuǎn)錄終止子。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一核苷酸序列或所述第二核苷酸序列進(jìn)一步包含插入所述轉(zhuǎn)錄終止子的5′的土撥鼠肝炎轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件(WPRE)。
11.權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的組合物，其中所述二分核定位信號(hào)包含選自下組的氨基酸序列：KRPAATKKAGQAKKKK(SEQ ID NO:344)、KKTELQTTNAENKTKKL(SEQ ID NO:345)、KRGINDRNFWRGENGRKTR(SEQ ID NO:346)和RKSGKIAAIVVKRPRK(SEQ ID NO:347)。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述二分核定位信號(hào)包含如SEQ ID NO:344中所示的氨基酸序列。
13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述Cas9蛋白是催化無活性的Cas9(dCas9)或Cas9切口酶(nCas9)，并且其中(i)的所述第一核苷酸序列進(jìn)一步包含編碼核堿基修飾酶的核苷酸序列，所述核堿基修飾酶與所述Cas9蛋白的N-末端部分的N-末端融合。
14.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的組合物，其中所述Cas9蛋白是催化無活性的Cas9(dCas9)或Cas9切口酶(nCas9)，并且其中(ii)的所述第二核苷酸序列進(jìn)一步包含編碼核堿基修飾酶的核苷酸序列，所述核堿基修飾酶與所述Cas9蛋白的C-末端部分的C-末端融合。
15.權(quán)利要求13或14的組合物，其中所述核堿基修飾酶是脫氨酶。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述脫氨酶是胞嘧啶脫氨酶。
17.權(quán)利要求15的組合物，其中所述脫氨酶是腺苷脫氨酶。
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