[發(fā)明專利]新穎的內(nèi)-β-N-乙酰基氨基葡糖苷酶

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780074557.1
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN110036109A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 伊藤華子;小野泰典;中村健介
• 申請（專利權(quán)）人: 第一三共株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/21;C12N9/42;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李連濤;梅黎

1.一種具有以下性質(zhì)(A)和(B)的多肽：

(A) 所述多肽包含與SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列具有75%或更多同一性和95%或更多相似性的氨基酸序列，且是不同于SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的氨基酸序列；和

(B) 所述多肽在45-60℃的任何溫度對復(fù)雜糖鏈表現(xiàn)出的水解活性和/或轉(zhuǎn)糖基活性是最大活性值的40%或更多。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，所述多肽具有以下性質(zhì)(A)和(B)：

(A) 所述多肽包含與SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列具有75%或更多同一性和95%或更多相似性的氨基酸序列，和與SEQ ID NO: 1的氨基酸位置191-195的氨基酸序列對應(yīng)的位置處的Leu-Ala-Lys-Leu-Leu (LAKLL)的氨基酸序列；

(B) 所述多肽在45-60℃的任何溫度對復(fù)雜糖鏈表現(xiàn)出的水解活性是最大活性值的40%或更多。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中在50℃對復(fù)雜糖鏈的水解活性是最大活性值的60%或更多。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任一項所述的多肽，其中，除了具有性質(zhì)(A)和(B)以外，(C)所述多肽在大腸桿菌中的重組表達(dá)中以10 mg/L培養(yǎng)物或更多的量產(chǎn)生。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任一項所述的多肽，其中所述多肽與SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的氨基酸位置54-341的區(qū)域具有85%或更多序列同一性。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中的任一項所述的多肽，其中氨基酸D276、V223、W225、Y247和W248中的至少一個保持不變且優(yōu)選地至少D276保持不變。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任一項所述的多肽，其中所述多肽是由SEQ ID NO: 1的氨基酸序列組成的多肽或由在SEQ ID NO: 1的氨基酸序列中具有至少一個選自A128T、D333G、I434L、V460A、I527V、K569T、F610S和H626R的突變的氨基酸序列組成的多肽。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其中所述多肽由SEQ ID NO: 1-6中的任一個的氨基酸序列組成。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-6中的任一項所述的多肽，其中所述多肽具有滿足性質(zhì)(A)的氨基酸序列且具有在SEQ ID NO: 23中所含的突變中的至少一個。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多肽，其中所述多肽具有在至少一個選自N172、D176、Y214、S216、L245、N246、T275、L306、F307和A310的氨基酸中的突變且具有增加的轉(zhuǎn)糖基活性。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多肽，其中所述多肽具有至少一個選自以下的突變：

其中N172被置換為Gln、Asp、Gly、Ala、Phe、Cys、His、Ile、Ser、Thr、Val或Met的突變；其中D176被置換為Arg的突變；其中Y214被置換為Phe的突變；其中S216被置換為Val的突變；其中L245被置換為Ser的突變；其中N246被置換為Asp的突變；其中T275被置換為Ile的突變；其中F283被置換為Ser的突變；其中L306被置換為Ile的突變；其中F307被置換為Tyr的突變；其中A310被置換為Asp的突變；和其中E314被置換為Gln的突變。

12.根據(jù)權(quán)利要求9-11中的任一項所述的多肽，其中所述多肽具有其中W278被置換為Phe或Tyr的突變。

13.一種多核苷酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1-12中的任一項所述的多肽。