[發明專利]結腸類器官及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 201780073347.0
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN110062764A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: J·M·威爾斯;J·O·穆尼拉
• 申請（專利權）人: 兒童醫院醫學中心
• 主分類號: C07K14/485
• 分類號: C07K14/485;C07K14/50;C07K14/51;C12N5/00
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;袁元

1.一種誘導人類結腸類器官形成的方法，其包含以下步驟：

a.使定形內胚層(DE)與FGF信號傳導途徑激活物和WNT信號傳導途徑激活物(例如，CHIRON/GSK2抑制劑)接觸持續足以使所述DE形成中-后腸球狀體的時間段；

b.使步驟(a)的所述中-后腸球狀體與BMP激活物和EGF信號傳導途徑激活物接觸持續足以形成所述人類結腸類器官的時間段，其中所述人類結腸類器官表達SATB2。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述DE源自選自以下的前體細胞：胚胎干細胞、胚胎生殖細胞、誘導多能干細胞、中胚層細胞、定形內胚層細胞、后內胚層細胞、后腸細胞或其組合。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述FGF信號傳導途徑激活物選自小分子FGF信號傳導途徑激活物、基于蛋白質的FGF信號傳導途徑激活物、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23或其組合。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述WNT信號傳導途徑激活物選自蛋白質Wnt信號傳導途徑激活物、小分子Wnt信號傳導途徑激活物，優選氯化鋰；2-氨基-4,6-二取代嘧啶(雜)芳基嘧啶；IQ1；QS11；NSC668036；DCA β-連環蛋白；2-氨基-4-[3,4-(亞甲二氧基)-芐基-氨基]-6-(3-甲氧基苯基)嘧啶、Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、Wnt16、GSK3抑制劑，優選CHIRON，或其組合。

5.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述BMP激活物選自BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、激活BMP途徑的小分子、激活BMP途徑的蛋白質Noggin、Dorsomorphin、LDN189、DMH-1、ventromophin及其組合。

6.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中足以使所述DE形成中-后腸球狀體的所述時間段通過步驟(a)的所述中-后腸球狀體的CDX2表達來確定。

7.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中足以使所述中-后腸球狀體形成所述人類結腸類器官的所述時間段通過所述人類結腸類器官的細胞的SATB2和CDX2表達。

8.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述HCO的特征在于存在結腸腸內分泌細胞(EEC)。

9.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述HCO的特征在于存在隱窩并且基本上不含絨毛。

10.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述HCO包含結腸特異性杯狀細胞。

11.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述HCO基本上不含潘氏(Paneth)細胞。

12.據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述HCO分泌結腸特異性激素INSL5。

13.一種HCO，其根據權利要求1至7中任一項所述的方法獲得。

14.一種形成結腸組織的方法，其包含在哺乳動物，優選嚙齒動物，優選免疫受損的嚙齒動物，優選免疫受損的小鼠的腎囊下植入根據權利要求1至7中任一項所述的HCO。