[發明專利]用于改善的免疫細胞療法的靶向基因插入

在審

• 申請號: 201780072672.5
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN110023490A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 布萊恩·布瑟爾;菲利普·杜沙托;亞歷山大·朱利拉特;洛朗·普瓦羅;朱利安·瓦爾頓
• 申請（專利權）人: 塞勒克提斯公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;A61K35/17;C12N15/90;C12N9/22;C12N5/0783
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 張曉影

1.用于制備用于細胞免疫療法的工程化原代免疫細胞的方法，所述方法包括：

-提供原代免疫細胞的群；

-向所述原代免疫細胞的一部分中引入：

i)至少一種核酸，包含要整合在選定內源基因座上的外源核苷酸或多核苷酸序列，以編碼改善所述免疫細胞的群的治療潛力的至少一種分子；

ii)特異性靶向所述選定內源基因座的至少一種序列特異性試劑，

其中通過靶向的基因整合將所述外源核苷酸或多核苷酸序列插入所述內源基因座，使得所述外源核苷酸或多核苷酸序列形成受存在于所述基因座處的內源啟動子的轉錄控制的外源編碼序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述序列特異性試劑是核酸酶。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中通過同源重組或NHEJ至所述免疫細胞內操作所述靶向的基因整合。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其中選擇所述內源啟動子以在免疫細胞活化期間具有活性。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中由所述外源編碼序列編碼的所述分子是RNA轉錄物如RNAi，或多肽如功能蛋白。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中改善所述原代免疫細胞的群的治療潛在活性的所述分子賦予所述免疫細胞抗藥性，增加所述免疫細胞的持久性(體內或體外)或其安全性。

7.根據權利要求6所述的方法，其中增強所述原代免疫細胞的持久性的所述分子選自細胞因子受體、賦予抗藥性的蛋白質或者針對抑制性肽或蛋白質的分泌型抗體。

8.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述外源編碼序列編碼IL-2、IL-12或IL-15。

9.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中賦予抗藥性的所述外源編碼序列編碼二氫葉酸還原酶(DHFR)、肌苷單磷酸脫氫酶2(IMPDH2)、鈣調磷酸酶或甲基鳥嘌呤轉移酶(MGMT)、mTORmut和Lckmut。

10.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述外源序列編碼趨化因子或細胞因子，例如IL-2、IL-12和IL-15。

11.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中增強治療活性的所述外源序列編碼FOXP3的抑制劑。

12.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中增強T細胞的治療活性的所述外源序列編碼腫瘤相關巨噬細胞(TAM)的分泌性抑制劑，例如CCR2/CCL2中和劑。

13.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中增強所述原代免疫細胞的安全性的所述外源序列編碼嵌合抗原受體(CAR)的組分。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述CAR是有助于所述免疫細胞針對特定細胞類型的改善特異性的抑制性CAR。

15.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中增強所述原代免疫細胞的安全性的所述外源序列編碼具有直接殺死所述細胞、與其它化合物組合殺死所述細胞或通過活化其它化合物殺死所述細胞的能力的因子。

16.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中增強所述原代免疫細胞的安全性的所述外源序列編碼細胞凋亡CAR的組分。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述細胞凋亡CAR包含FasL(CD95)。