[發明專利]用于目標分子展示的共價融合的病毒外被蛋白

在審

• 申請號: 201780069666.4
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN109937052A
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: S·托蒂;K·穆西丘克
• 申請（專利權）人: 弗勞恩霍費爾美國股份有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/12
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

提供了融合蛋白，其包含第一重組病毒外被蛋白、第二重組病毒外被蛋白和第一連接肽。所述第一重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的N?末端連接。所述第二重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的C?末端連接。所述第一和第二重組病毒外被蛋白衍生自苜蓿花葉病毒(AIMV)的外被蛋白(CP)。所述融合蛋白可以形成病毒樣顆粒(VLP)。當所述融合蛋白進一步包含目標蛋白時，所述目標蛋白可以展示在所述VLP的表面上。還提供了生產所述融合蛋白和所述VLP的方法，以及所述融合蛋白和/或所述VLP的用途。

相關申請的交叉引用

本申請要求2016年11月11日提交的美國臨時申請No.62/420,993的優先權，其完整公開內容為了所有目的通過引用以它們的整體合并在本文中。

技術領域

本發明涉及共價融合的病毒外被蛋白以及由此形成的病毒樣顆粒，來展示目標分子。

背景技術

病毒樣顆粒(Virus-like particle，VLP)疫苗是重組生產的疫苗，它們重復、高密度地展示期望的抗原，并且已經顯示了提高針對抗原的免疫應答。所有商業上可獲得的重組生產的疫苗都是VLP的形式。

Peyret等人報道，乙型肝炎核心蛋白HBcAg上的主要插入區(major insertionregion，MIR)容許插入外源序列，用于將該外源序列編碼的外源蛋白(例如，單結構域抗體片段)展示在VLP外側的表面刺突結構的尖端，VLP由兩個HBcAg開放閱讀框串聯融合的單個多肽鏈組裝而成，這種串聯核心策略容許在各刺突的兩個MIR之一中插入大的異源序列而不損害VLP形成。(Peyret等人(2015)PLoS ONE 10(4):e0120751.doi:10.1371/journal.pone.0120751；美國專利申請公開No.2016/0122420 A1)。由于MIR位點是暴露得最多的，由HBc顆粒誘導的大多數抗體識別該區域，該抗原位點的免疫顯性(immunodominance)轉移到插入MIR位點的外源序列。(Peyret等人(2015)PLoS ONE 10(4):e0120751.doi:10.1371/journal.pone.0120751)。

大多數病毒外被蛋白不具有用于制造VLP疫苗的HBcAg蛋白的抗原性MIR位點。因而，仍然需要對于制造有效的VLP疫苗有用的病毒外被蛋白如苜蓿花葉病毒(AIMV)外被蛋白(CP)的融合蛋白。

發明內容

本發明涉及融合蛋白，其包含兩個或多個重組病毒外被蛋白和任選的目標蛋白，以及由所述融合蛋白形成的病毒樣顆粒(VLP)。

本發明提供了融合蛋白，其包含第一重組病毒外被蛋白、第二重組病毒外被蛋白和第一連接肽。所述第一重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的N-末端連接，所述第二重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的C-末端連接。所述第一重組病毒外被蛋白包含與苜蓿花葉病毒(AIMV)的外被蛋白(CP)的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)至少80％相同的氨基酸序列。所述第二重組病毒外被蛋白包含與SEQ ID NO:1至少80％相同的氨基酸序列。所述第一連接肽可以由SEQ ID NO:2組成。

本發明還提供了融合蛋白，其包含目標蛋白、第一重組病毒外被蛋白、第二重組病毒外被蛋白和第一連接肽。所述目標蛋白處在所述第一重組病毒外被蛋白的N-末端。所述第一重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的N-末端連接。所述第二重組病毒外被蛋白與所述第一連接肽的C-末端連接。所述第一重組病毒外被蛋白包含與苜蓿花葉病毒(AIMV)的外被蛋白(CP)(SEQ ID NO:1)至少80％相同的氨基酸序列。所述第二重組病毒外被蛋白包含與SEQ ID NO:1至少80％相同的氨基酸序列。所述第一連接肽可以由SEQ ID NO:2組成。