[發明專利]重組DNA聚合酶

有效

• 申請號: 201780069442.3
• 申請日: 2017-01-09
• 公開（公告）號: CN109937252B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 王林;劉芬;董宇亮;章文蔚;徐崇鈞;斯內扎娜·德馬納克
• 申請（專利權）人: 深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

1.一種蛋白質，是如下A）-D）中任一種：

A）所示的蛋白為將野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408位亮氨酸突變為異亮氨酸，第409位酪氨酸突變為丙氨酸，第485位丙氨酸突變為谷氨酸，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白；

B）所示的蛋白為將野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408位亮氨酸突變為異亮氨酸，第409位酪氨酸突變為丙氨酸，第485位丙氨酸突變為谷氨酸，且對所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位這13位中至少一位的氨基酸殘基進行修飾，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白；

C）所示的蛋白為將A）或B）所示蛋白的氨基酸序列C端的自末端起1-29個氨基酸去除，保留其余氨基酸殘基且具有DNA聚合酶活性的由A）衍生的蛋白質；

D）所示的蛋白為將A）或B）或C）所示蛋白的氨基酸序列末端添加標簽序列且具有DNA聚合酶活性的由A）或B）或C）衍生的蛋白質；

所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列為序列1。

2.根據權利要求1所述的蛋白質，其特征在于：

B）所示的蛋白為將野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408位亮氨酸突變為異亮氨酸，第409位酪氨酸突變為丙氨酸，第485位丙氨酸突變為谷氨酸，且對所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位這13位中至少2位的氨基酸殘基進行修飾，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白。

3.根據權利要求1或2所述的蛋白質，其特征在于：

B）所示的蛋白為將野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408位亮氨酸突變為異亮氨酸，第409位酪氨酸突變為丙氨酸，第485位丙氨酸突變為谷氨酸，且對所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位這13位中至少3位的氨基酸殘基進行修飾，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白。

4.根據權利要求1-3中任一所述的蛋白質，其特征在于：所述修飾為氨基酸置換。

5.根據權利要求4所述的蛋白質，其特征在于：

第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位這13位中至少一位的氨基酸殘基置換為甲硫氨酸或苯丙氨酸或丙氨酸。

6.根據權利要求5所述的蛋白質，其特征在于：

所述第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位這13位中至少一位的氨基酸殘基置換為甲硫氨酸或苯丙氨酸或丙氨酸為如下：

第53位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第59位的組氨酸置換為苯丙氨酸；

第199位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第243位的精氨酸置換為甲硫氨酸；

第526位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第558位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第613位的精氨酸置換為甲硫氨酸；

第641位的精氨酸置換為甲硫氨酸；

第671位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第673位的酪氨酸置換為苯丙氨酸；

第674位的賴氨酸置換為丙氨酸；

第692位的賴氨酸置換為甲硫氨酸；

第709位的精氨酸置換為甲硫氨酸。

7.根據權利要求1-6中任一所述蛋白，其特征在于：

所述蛋白質的對生物芯片的吸附能力低于所述野生型KOD型DNA聚合酶。

8.根據權利要求7所述蛋白，其特征在于：

所述蛋白質的對生物芯片的吸附能力低于所述野生型KOD型DNA聚合酶體現在與所述野生型KOD型DNA聚合酶相比，所述蛋白質不易吸附于生物芯片表面和/或易于從生物芯片表面洗脫。