[發(fā)明專利]生物標(biāo)志物、疾病關(guān)聯(lián)基因的探索方法及腎癌標(biāo)志物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780067027.4
• 申請(qǐng)日: 2017-10-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109906382A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 植田幸嗣;大西直美;野野村祝夫;植村元秀;藤田和利;辻川和丈;神宮司健太郎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 公益財(cái)團(tuán)法人癌研究會(huì);國(guó)立大學(xué)法人大阪大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;C12Q1/68;G01N33/15;G01N33/50;G01N33/574;G01N33/92
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳;狄茜

將疾病組織以及從其周邊得到的正常組織在培養(yǎng)基中靜置，探索滲出的疾病特異性的生物標(biāo)志物。通過(guò)該方法，發(fā)現(xiàn)了腎細(xì)胞癌特異性的生物標(biāo)志物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種將細(xì)胞外囊泡進(jìn)行分離、精制，鑒定生物標(biāo)志物、疾病關(guān)聯(lián)基因的方法、以及檢查方法。另外，涉及使用該探索方法得到的腎癌標(biāo)志物。

背景技術(shù)

生物標(biāo)志物是指與身體的正常過(guò)程或病態(tài)過(guò)程、或者對(duì)治療的藥理學(xué)反應(yīng)相關(guān)的生物體內(nèi)的物質(zhì)或圖像數(shù)據(jù)，成為身體狀態(tài)的客觀指標(biāo)。生物標(biāo)志物包含生化學(xué)檢查、血液檢查、腫瘤標(biāo)志物之類的所謂的臨床檢查值、CT或MRI之類的圖像診斷數(shù)據(jù)等各種各樣的標(biāo)志物。特別是作為疾病的指標(biāo)表示疾病的存在或分級(jí)的生物標(biāo)志物在疾病的發(fā)現(xiàn)、診斷、預(yù)后預(yù)測(cè)等目前的診療中是不可缺少的。另外，在新藥開(kāi)發(fā)中，生物標(biāo)志物在開(kāi)發(fā)化合物的選擇和評(píng)價(jià)中被利用。

近年來(lái)，能夠檢出極微量的蛋白質(zhì)或核酸的技術(shù)的開(kāi)發(fā)、基因組分析和蛋白質(zhì)組分析的進(jìn)展使得許多生物標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)。但是，在實(shí)際上，臨床中被使用的標(biāo)志物是其中極少的。特別是在疾病的初期的階段，在缺乏自覺(jué)癥狀的癌或神經(jīng)變性疾病等疾病中，期望作為診斷或新藥研發(fā)工具有用的生物標(biāo)志物。但是，被實(shí)用化的生物標(biāo)志物幾乎沒(méi)有。

例如，腎細(xì)胞癌在許多情況下幾乎沒(méi)有癥狀，進(jìn)入晚期后才被發(fā)現(xiàn)的情況占大半。最近，雖然在健康診斷或其它疾病中接受超聲波檢查或CT檢查時(shí)偶然被發(fā)現(xiàn)的情況增加，但是，依然認(rèn)為是難以早期發(fā)現(xiàn)的癌。專利文獻(xiàn)1～3中報(bào)告了腎細(xì)胞癌的生物標(biāo)志物，但尚未達(dá)到實(shí)用化。

近年來(lái)，在使用了生物標(biāo)志物的臨床診斷的領(lǐng)域中，液體活檢(Liquid Biopsy，體液診斷)備受關(guān)注。液體活檢在癌的診斷區(qū)域中，不進(jìn)行采取腫瘤組織的現(xiàn)有的活檢(活體組織檢查)，而是將體液作為被檢體使用，檢出癌細(xì)胞或測(cè)定生物標(biāo)志物，由此可以非侵襲性、低侵襲性地檢出疾病。

作為液體活檢的分析對(duì)象，源自血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating Tumor Cells；CTC)或癌細(xì)胞的DNA(Circulating Tumor DNA；ctDNA)是人們所熟知的。但是，由于設(shè)想CTC或ctDNA是在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)被檢出的，所以認(rèn)為雖然適于癌的預(yù)后預(yù)測(cè)，但是不能在早期診斷中使用。因此，作為用于以癌為主以及其它疾病的早期診斷的分析對(duì)象，細(xì)胞外囊泡(Extracellular vesicles，以下有時(shí)記載為EVs。)備受關(guān)注。

細(xì)胞外囊泡為從幾乎所有細(xì)胞中釋放的囊泡，根據(jù)其大小或表露的標(biāo)志物分子大致區(qū)分為外泌體、微囊泡、凋亡小體。近年得知細(xì)胞外囊泡擔(dān)負(fù)各種作用。特別是得知在外泌體或微囊泡中含有mRNA、microRNA等核酸、蛋白質(zhì)，不僅參與接近的細(xì)胞間的通信，而且參與臟器間的通信(非專利文獻(xiàn)1～4)。

有報(bào)告細(xì)胞外囊泡與癌癥中包括血管新生、免疫抑制、轉(zhuǎn)移的癌的進(jìn)展有關(guān)。進(jìn)而，根據(jù)細(xì)胞外囊泡中所含的特殊的整聯(lián)蛋白的組成，暗示癌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備的可能性(非專利文獻(xiàn)5)。由此可見(jiàn)，細(xì)胞外囊泡也與疾病的進(jìn)展有關(guān)，內(nèi)包于細(xì)胞外囊泡的蛋白質(zhì)或核酸根據(jù)生物體的狀態(tài)而變化。因此，已知根據(jù)疾病的種類或狀態(tài)而在細(xì)胞外囊泡中檢出的蛋白質(zhì)或核酸不同，而成為生物標(biāo)志物。

但是，迄今為止所報(bào)告的研究結(jié)果為主要使用培養(yǎng)細(xì)胞而進(jìn)行的結(jié)果，完全沒(méi)有將從組織學(xué)上具備相同背景的疾病部位、正常部位得到的微囊泡進(jìn)行比較研究的數(shù)據(jù)。因此，是否在疾病的診斷或新藥開(kāi)發(fā)中作為有效的生物標(biāo)志物起作用尚存在疑問(wèn)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：日本特開(kāi)2016-86678號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本特開(kāi)2013-140030號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)3：日本特表2015-505965號(hào)公報(bào)

非專利文獻(xiàn)