[發明專利]分子量法鑒定和監測裂解免疫球蛋白

有效

• 申請號: 201780065950.4
• 申請日: 2017-09-07
• 公開（公告）號: CN109863395B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: D·R·巴尼奇;D·L·穆雷
• 申請（專利權）人: 梅約醫學教育與研究基金會
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72;G01N33/48;G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;錢文宇

本文涉及使用質譜技術鑒定和監測樣品(例如生物樣品)中免疫球蛋白裂解(例如IgG裂解)的材料和方法。

相關申請交叉引用

本申請要求2016年9月7日提交的美國專利申請No.62/384,445的優先權。該在先申請視為本申請公開內容的組成部分并將其全文納入。

背景

1.技術領域

本文涉及使用質譜技術鑒定和監測樣品(例如生物樣品)中免疫球蛋白裂解(例如IgG裂解)的材料和方法。

2.背景信息

IgG同種型免疫球蛋白可用外源酶如木瓜蛋白酶和化膿性鏈球菌(Streptococcuspyogenes)的IgG降解酶(IdeS)裂解。這些酶產生的片段稱為Fc部分(含有重鏈恒定區)和Fab'或F(ab')₂部分(含有重鏈可變區和輕鏈)。血清中的這些IgG片段通常用低分辨率凝膠電泳來監測。

發明概要

本文提供使用質譜技術鑒定和監測樣品(例如生物樣品)中免疫球蛋白裂解(例如IgG裂解)的材料和方法。

如本文所示，存在內源性酶(例如纖溶酶)在體內裂解IgG從而產生IgG裂解產物。Fc和Fab片段的準確分子量與“自上而下(Top-down)MS”結合可用于鑒定患者血清中纖溶酶所致IgG裂解，提示補體系統的活化。該方法優勢在于是一種靈敏且特異的診斷工具，有助于監測患者的免疫系統。

總體而言，本文一個方面的特征包括用于檢測患者中IgG裂解的方法，用于鑒定患者中纖溶酶活化的方法，以及用于檢測患者中補體活化的方法。這些方法包括或基本由以下組成：提供患者的含IgG樣品，對樣品進行質譜技術以獲取樣品的質譜圖，并鑒定IgG裂解片段的存在情況。樣品可能被疑有纖溶酶IgG裂解。樣品可以是血液樣品(如血清樣品)。患者可以是人。IgG裂解片段可以是纖溶酶產生的IgG裂解片段。IgG裂解片段可包含氨基酸序列THTCPPCPAPEL(SEQ?ID?NO:2)。IgG裂解片段可以是糖基化的。IgG裂解片段可以來自多克隆IgG或單克隆IgG。本文所述方法還包括從樣品中分離IgG。本文所述方法還包括從樣品中富集IgG。本文所述方法還可包括樣品在進行質譜技術之前接觸還原劑。還原劑可以是二硫蘇糖醇(DTT)。質譜技術可以是電噴霧電離質譜法(ESI-MS)。LC-MS/MS技術可以包括四極飛行時間(TOF)質譜儀。質譜技術可以是“自上而下(Top-down)”質譜技術。

另一方面，本發明包括鑒定患者中炎癥的方法。該方法包括或基本由以下組成：提供患者樣品，對樣品進行質譜技術以獲取樣品的質譜圖，并鑒定IgG裂解片段的存在情況。樣品可以是血液樣品(如血清樣品)。患者可以是人。IgG裂解片段可以包括Fc片段。IgG裂解片段可以是糖基化的。IgG可以是多克隆IgG或單克隆IgG。所述方法還包括從樣品中分離IgG。這些方法還可包括樣品進行質譜技術前接觸還原劑。還原劑可以是DTT。質譜可以是ESI-MS。LC-MS/MS技術可以包括四極TOF質譜儀。質譜技術可以是自上而下質譜技術。所述方法可以包括區分對象中是自身免疫性炎癥還是感染性炎癥。自身免疫性炎癥患者的樣品可能含有纖溶酶產生的IgG裂解片段。纖溶酶產生的IgG裂解片段可包含氨基酸序列THTCPPCPAPEL(SEQ?ID?NO:2)。自身免疫性炎癥可以是綜合征，類風濕性關節炎，紅斑狼瘡或脈管炎。感染性炎癥患者的樣品可能包含化膿性鏈球菌(Streptococcuspyogenes)IgG-降解酶(IdeS)產生的IgG裂解片段。感染可能是化膿性鏈球菌(Streptococcus?pyogenes)感染。