[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)AAV的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780063531.7
• 申請(qǐng)日: 2017-08-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110168080A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: X·金;C·R·奧里奧登;L·劉;K·張
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 建新公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00;C12N15/86;G01N33/68
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種確定腺相關(guān)病毒(AAV)顆粒的血清型的方法，其包括

a)使該AAV顆粒變性，

b)使該變性的AAV顆粒經(jīng)歷液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)，并且

c)確定該AAV顆粒的VP1、VP2和VP3的質(zhì)量；

其中VP1、VP2和VP3的質(zhì)量的特定組合指示該AAV血清型。

2.權(quán)利要求1的方法，其中將VP1、VP2和VP3的計(jì)算質(zhì)量與一種或多種AAV血清型的VP1、VP2和VP3的理論質(zhì)量進(jìn)行比較。

3.一種確定AAV顆粒的異質(zhì)性的方法，其包括

a)使該AAV顆粒變性，

b)使該變性的AAV顆粒經(jīng)歷液相色譜/質(zhì)譜/質(zhì)譜(LC/MS/MS)，

c)確定該AAV顆粒的VP1、VP2和VP3的質(zhì)量，并且

d)將步驟c)的質(zhì)量與該AAV血清型的VP1、VP2和VP3的理論質(zhì)量進(jìn)行比較；

其中VP1、VP2或VP3的質(zhì)量中的一個(gè)或多個(gè)的偏差指示AAV衣殼異質(zhì)性。

4.權(quán)利要求3的方法，其中該異質(zhì)性包括混合血清型、變體衣殼、衣殼氨基酸取代、截短衣殼或修飾衣殼中的一種或多種。

5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中用乙酸、鹽酸胍和/或有機(jī)溶劑使該AAV顆粒變性。

6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中該液相色譜是反相液相色譜、尺寸排阻色譜、親水相互作用液相色譜或陽(yáng)離子交換色譜。

7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中該液相色譜是反相液相色譜。

8.權(quán)利要求7的方法，其中該反相色譜是C4或C8反向色譜。

9.權(quán)利要求8的方法，其中該色譜使用包含甲酸水溶液的流動(dòng)相A。

10.權(quán)利要求9的方法，其中該流動(dòng)相A包含約0.1％甲酸。

11.權(quán)利要求8-10中任一項(xiàng)的方法，其中該色譜包含流動(dòng)相B，其包含甲酸乙腈溶液。

12.權(quán)利要求11的方法，其中該流動(dòng)相B包含約0.1％甲酸。

13.權(quán)利要求11或12的方法，其中該色譜中流動(dòng)相B的比例隨時(shí)間增加。

14.權(quán)利要求13的方法，其中該色譜中流動(dòng)相B的比例以逐步方式增加。

15.權(quán)利要求14的方法，其中流動(dòng)相B從約10％增加到約20％，從約20％增加到約30％，并且從約30％增加到約38％。

16.權(quán)利要求15的方法，其中流動(dòng)相B在約6分鐘內(nèi)從約10％增加到約20％，在約10分鐘內(nèi)從約20％增加到約30％，并且在約40分鐘內(nèi)從約30％增加到約38％。

17.權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的方法，其中該液相色譜是超高效液相色譜(UPLC)。

18.權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中該質(zhì)譜包括約3.5kV的毛細(xì)管電壓。

19.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中該質(zhì)譜包括約45V的采樣錐電壓。

20.權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)的方法，其中該質(zhì)譜包括輔助校準(zhǔn)。

21.權(quán)利要求20的方法，其中將碘化鈉用作校準(zhǔn)物。