[發明專利]維持細胞存活率的組合物和方法

在審

• 申請號: 201780061605.3
• 申請日: 2017-10-04
• 公開（公告）號: CN109790514A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 張雅瑄;林政毅;趙志源
• 申請（專利權）人: 全崴生技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12N5/071
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 曹立莉

本發明提供了包含明膠的穩定細胞的介質。所述穩定細胞的介質有助于維持細胞存活率，例如在將冷凍保存后的生物材料解凍之后。

相關申請的交叉引用

本申請要求美國臨時申請號62/404,170(2016年10月4日提交)和62/405,477(2016年10月7日提交)的優先權，其全部內容通過引用并入本發明。本申請還涉及2017年10月4日提交的名稱為“用于細胞冷凍保存的組合物和方法”的國際申請號PCT/CN2017/，其全部內容通過引用并入本發明。

技術領域

本發明主要涉及在體外維持生物材料的存活率的領域。更具體地說，本發明涉及用于在冷凍保存之后解凍時維持生物材料(例如：細胞以及組織)的存活率的組合物和方法。

背景技術

0℃或0℃以下的冷凍保存技術通常用于長期保存生物材料，例如：動物和植物的細胞和組織(包括人類細胞和組織)。請參閱Thompson等人,Cryopreservation andThawing of Mammalian Cells,December 2014,eLS,John Wiley&Sons,Ltd:Chichester.DOI:10.1002/9780470015902.a0002561.pub2。有效長期儲存哺乳動物細胞對于可否將這些細胞成功的應用于臨床和作為研究工具是至關重要的。舉例來說，干細胞可應用于細胞移植、組織工程和再生醫學。而冷凍保存的卵母細胞、精子和胚胎則可用于輔助生殖技術。在移植醫學中，需要冷凍保存皮膚、眼角膜、胰島和心臟瓣膜等活體組織。

細胞可保存于零度以下(例如：-70℃以下)達數月或數年。然而，細胞于解凍時以及解凍后并不穩定。主要由存活率表示的細胞穩定性隨著細胞在解凍過程期間和之后接觸的環境而變化。已經顯示，解凍速率、滲透應力以及冷凍保護劑的毒性會在解凍后損傷細胞。請參閱Thompson等人,Cryopreservation and Thawing of Mammalian Cells,December 2014,eLS,John Wiley&Sons,Ltd:Chichester.DOI:10.1002/9780470015902.a0002561.pub2。如果將所述細胞注射入受試者中(例如：通過細胞治療、輸血或骨髓移植等方式)，則如何于解凍后獲得較高細胞存活率是非常重要的，因為再注射死亡或損傷的細胞是無效的。同樣地，當細胞必須被重新培養時，高的細胞存活率同樣也是重要的。

當細胞從冷凍狀態轉變為代謝活性狀態時，如何維持其存活率是一項具有挑戰性的任務。因此，有必要改進用于維持解凍后的細胞存活率的介質和方法。

發明內容

本發明提供一種含有約5wt％至約15.7wt％、約5wt％至約7.5wt％、約10wt％至約15.7wt％、約0.8wt％至約15.7wt％、約2.4wt％至約7wt％或者約9.3wt％至約14.6wt％明膠的穩定細胞的介質(前述的百分比為相對于穩定細胞的介質的總重量百分比)。

本發明還提供一種組合物，其包含生物材料(例如：一個或多個細胞、組織、器官和/或病毒顆粒)以及含有約0.8wt％至約15.7wt％、約2.4wt％至約7wt％或者約9.3wt％至約14.6wt％的明膠。

在一些實施方案中，生物材料(例如：一個或多個細胞、組織、器官和/或病毒顆粒)已經從冷凍保存狀態解凍。在一些實施方案中，解凍后的細胞存活率至少為70％或至少為80％。

本發明提供一種用于維持生物材料存活率(例如：細胞存活率)的方法，該方法包括：將生物材料(例如：一個或多個細胞、組織、器官和/或病毒顆粒)與穩定細胞的介質混合以形成混合物(或形成穩定細胞的介質和生物材料(例如：一個或多個細胞、組織、器官和/或病毒顆粒)的組合)。