[發明專利]一種采用細胞培養基自臍帶羊膜中分離間充質干細胞的方法在審
| 申請號： | 201780061207.1 | 申請日： | 2017-10-05 |
| 公開（公告）號： | CN109804063A | 公開（公告）日： | 2019-05-24 |
| 發明（設計）人： | T·T·潘 | 申請（專利權）人： | 細胞研究私人有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775;A61K35/51 |
| 代理公司： | 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382 | 代理人： | 曹津燕;丁磊 |
| 地址： | 新加坡新加*** | 國省代碼： | 新加坡;SG |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 培養基 臍帶 羊膜 間充質干細胞群 充質干細胞 標記物 細胞培養基 藥物組合物 干細胞群 臍帶組織 胎牛血清 細胞表達 爾貝 改良 | ||
1.一種自臍帶的羊膜中分離間充質干細胞群的方法，所述方法包括在培養基中培養臍帶組織，所述培養基包含DMEM(杜爾貝科改良伊格爾培養基)、F12(哈姆F12培養基)、M171(培養基171)和FBS(胎牛血清)。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約55至65％(v/v)的DMEM，終濃度為約5至15％(v/v)的F12，終濃度為約15至30％(v/v)的M171和終濃度為約1至8％(v/v)的FBS。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約57.5至62.5％(v/v)的DMEM，終濃度為約7.5至12.5％(v/v)的F12，終濃度為約17.5至25.0％(v/v)的M171和終濃度為約1.75至3.5％(v/v)的FBS。
4.根據權利要求3所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約61.8％(v/v)的DMEM，終濃度為約11.8％(v/v)的F12，終濃度為約23.6％(v/v)的M171和終濃度為約2.5％(v/v)的FBS。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述培養基進一步包含終濃度為約1ng/ml至約20ng/ml的表皮生長因子(EGF)。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約10ng/ml的EGF。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約1μg/ml至10μg/ml的胰島素。
8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中所述培養基包含終濃度為約5μg/ml的胰島素。
9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述培養基進一步包含以下補充物中的至少一種：腺嘌呤、氫化可的松和3,3’,5-三碘-L-甲狀腺原氨酸鈉鹽(T3)。
10.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述培養基包含腺嘌呤、氫化可的松和3,3’,5-三碘-L-甲狀腺原氨酸鈉鹽(T3)中的全部三種。
11.根據權利要求11或12所述的方法，其中所述培養基以約0.01至約0.1μg/ml腺嘌呤的終濃度包含腺嘌呤，以約0.1至約10μg/ml氫化可的松的終濃度包含氫化可的松，和/或以約0.5至約5ng/ml的終濃度包含3,3’,5-三碘-L-甲狀腺原氨酸鈉鹽(T3)。
12.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其包括培養所述臍帶組織直至所述羊膜的間充質干細胞的細胞生長暈達到約70-80％融合。
13.根據權利要求12所述的方法，其包括自用于所述培養的培養容器中移除所述間充質干細胞。
14.根據權利要求13所述的方法，其中通過酶處理進行自所述培養容器中移除所述間充質干細胞。
15.根據權利要求14所述的方法，其中所述酶處理包括胰蛋白酶消化。
16.根據權利要求13至15中任一項所述的方法，其中所述間充質干細胞轉移至用于傳代培養的培養容器中以傳代培養。
17.根據權利要求16所述的方法，其中所述間充質細胞以1.0x106個細胞/ml的濃度懸浮以傳代培養。
18.根據權利要求17所述的方法，其中在權利要求1至10中任一項所限定的培養基中傳代培養所述間充質干細胞。
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