[發(fā)明專(zhuān)利]瓊脂糖填充的陶瓷磷灰石

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780060779.8
• 申請(qǐng)日: 2017-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109803736B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖加利;C·貝利斯勒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 生物輻射實(shí)驗(yàn)室股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): B01D15/08
• 分類(lèi)號(hào): B01D15/08;B01D15/34;C01B25/32;C08L5/12
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳揚(yáng)揚(yáng);陶啟長(zhǎng)

提供了聚合物填充的陶瓷磷灰石及其用途。

本申請(qǐng)要求2016年9月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)62/401,560的權(quán)益，該申請(qǐng)通過(guò)引用整體并入本文。

背景技術(shù)

目前，從較小雜質(zhì)中純化病毒，與大顆粒偶聯(lián)的蛋白質(zhì)和其他生物大分子涉及使用多種分離方法，包括但不限于尺寸排阻色譜(SEC)，離子交換色譜(IEX)，疏水相互作用色譜(HIC)和/或離心。SEC要求填充昂貴的尺寸排阻樹(shù)脂的大柱，低流速和有限的樣品載量。IEX和HIC的選擇性有限。離心僅可應(yīng)用于與懸浮生物分子的培養(yǎng)基相比相對(duì)致密的生物大分子。

發(fā)明內(nèi)容

本文提供包含不溶性多孔聚合物的陶瓷磷灰石珠。在一些實(shí)施方式中，聚合物是瓊脂糖。在一些實(shí)施方式中，瓊脂糖不是交聯(lián)的。在一些實(shí)施方式中，瓊脂糖的濃度范圍為約1％至約8％。

在一些實(shí)施方式中，陶瓷磷灰石是陶瓷羥基磷灰石。

還提供了一種色譜柱，其包含含有不溶性多孔聚合物的多個(gè)陶瓷磷灰石珠，例如，如上文或本文其他地方所述。

還提供了制備含有不溶性多孔聚合物的陶瓷磷灰石珠的方法，例如，如上文或本文其他地方所述。在一些實(shí)施方式中，該方法包括在加熱的聚合物溶液中孵育陶瓷磷灰石；并且將具有陶瓷磷灰石的加熱的聚合物溶液冷卻至約4℃至約30℃之間，以在陶瓷磷灰石的孔內(nèi)形成不溶性多孔聚合物凝膠。在某些實(shí)施方式中，孵育步驟使聚合物吸收或以其他方式進(jìn)入陶瓷磷灰石的孔中。在一些實(shí)施方式中，加熱的聚合物溶液的溫度為約100℃。在某些實(shí)施方式中，加熱的聚合物溶液包含足夠濃度的聚合物以進(jìn)一步涂覆陶瓷磷灰石的外表面。在一些實(shí)施方式中，聚合物是瓊脂糖，并且瓊脂糖的濃度大于約1％，2％，3％或4％。在一些實(shí)施方式中，瓊脂糖的濃度為約4％。在一些實(shí)施方式中，在冷卻步驟之前除去過(guò)量的聚合物。在某些實(shí)施方式中，孵育步驟包括在攪拌下將加熱的有機(jī)溶劑和非離子洗滌劑加入到加熱的聚合物溶液中。在一些實(shí)施方式中，有機(jī)溶劑至少部分地與水不混溶并且相對(duì)于加熱的聚合物溶液中的聚合物是化學(xué)惰性的。在一些實(shí)施方式中，有機(jī)溶劑是異鏈烷烴(例如Isopar H)。在一些實(shí)施方式中，加熱的有機(jī)溶劑的溫度為約60℃至約80℃。在一些實(shí)施方式中，非離子型洗滌劑選自脫水山梨糖醇衍生物，乙氧基化烷基酚和聚乙氧基化酯。在一些實(shí)施方式中，脫水山梨糖醇衍生物是脫水山梨糖醇酯(例如司盤(pán)80)或聚乙氧基化脫水山梨糖醇酯。

還提供了進(jìn)行色譜法的方法。在一些實(shí)施方式中，該方法包括使包含靶分子的樣品在使該靶標(biāo)不被陶瓷磷灰石珠捕獲的條件下與包含不溶性多孔聚合物的多個(gè)陶瓷磷灰石珠接觸，所述陶瓷磷灰石珠例如本文所述；并從陶瓷磷灰石珠中收集靶分子。在一些實(shí)施方式中，樣品包含被陶瓷磷灰石珠捕獲的污染物。在一些實(shí)施方式中，靶分子是蛋白質(zhì)-納米顆粒偶聯(lián)物，并且污染物是游離的(未偶聯(lián)的)蛋白質(zhì)。在一些實(shí)施方式中，樣品包含蛋白質(zhì)-納米顆粒偶聯(lián)物，游離蛋白質(zhì)和緩沖劑。在一些實(shí)施方式中，樣品還包含表面活性劑(例如，聚亞烷基二醇或Pluronic F-68)。在某些實(shí)施方式中，收集步驟包括從陶瓷磷灰石珠中收集富含靶分子的一個(gè)或多個(gè)級(jí)分。在一些實(shí)施方式中，收集步驟包括向陶瓷磷灰石珠施加離心力或真空，并從陶瓷磷灰石珠中收集富含靶分子的一個(gè)或多個(gè)級(jí)分。在一些實(shí)施方式中，所述蛋白質(zhì)是抗體。在一些實(shí)施方式中，所述蛋白質(zhì)是IgG抗體。在某些實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)-納米顆粒偶聯(lián)物是蛋白質(zhì)-聚合物點(diǎn)偶聯(lián)物。在一些實(shí)施方式中，樣品還包含游離納米顆粒，并且陶瓷磷灰石珠將游離納米顆粒與偶聯(lián)物分離。

附圖說(shuō)明圖1是顯示標(biāo)準(zhǔn)陶瓷羥基磷灰石(CHT)和瓊脂糖填充的CHT的相似選擇性的重疊色譜圖。

發(fā)明詳述

本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一種具有多模式特性的新型聚合物填充陶瓷磷灰石，即尺寸排阻模式和捕獲模式。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)可以將不溶性多孔聚合物引入陶瓷磷灰石中而不顯著影響陶瓷磷灰石選擇性或結(jié)合能力。

定義