[發明專利]使用經掩蔽的半抗原在福爾馬林固定的石蠟包埋的組織中的蛋白鄰近測定法

有效

• 申請號: 201780060757.1
• 申請日: 2017-08-25
• 公開（公告）號: CN109791144B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: Y.貝洛斯盧切夫;T.D.德格爾;W.J.弗蘭奇;J.郝;B.D.凱利;A.穆里洛;N.W.波拉斯克
• 申請（專利權）人: 文塔納醫療系統公司
• 主分類號: G01N33/542
• 分類號: G01N33/542;G01N33/573;G01N33/58
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 梁謀;黃希貴

1.一種用于分析福爾馬林固定的石蠟包埋的(FFPE)樣品以確定所述FFPE樣品中的第一蛋白靶標是否與所述FFPE樣品中的第二蛋白靶標鄰近的方法，所述方法包括：

(a)?使所述FFPE樣品與第二暴露的酶-抗體綴合物接觸，以形成第二蛋白靶標-暴露的酶-抗體綴合物復合物，其中所第二暴露的酶-抗體綴合物的暴露的酶選自堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、酰胺酶、尿素酶、神經氨酸酶、β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、脂肪酶、硫酸酯酶和氧化還原酶；

(b)?使所述FFPE樣品與第一經掩蔽的半抗原-抗體綴合物接觸，以形成第一蛋白靶標-經掩蔽的半抗原-抗體綴合物復合物；

(c)?使所述第一蛋白靶標-經掩蔽的半抗原-抗體綴合物復合物的經掩蔽的半抗原暴露，以形成第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體綴合物復合物；

(d)?使所述FFPE樣品與第一檢測試劑接觸，以標記所述第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體綴合物復合物或所述第一蛋白靶標；和

(e)?檢測所述經標記的第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體綴合物復合物或經標記的第一蛋白靶標，

其中所述第一經掩蔽的半抗原-抗體綴合物具有式(IVC)或(IVD)的結構：

其中

“抗體”是抗體；

“半抗原”是半抗原，其選自吡唑類、硝基苯基化合物類、苯并呋咱類、苯并呋喃類、三萜類、脲類、硫脲類、魚藤酮、噁唑類、噻唑類、香豆素、硝基芳基類、環木酚素類、生物素、地高辛配基、熒光素、2-羥基喹喔啉和二硝基苯酚；

A是基團，所述基團包含分支的或未分支的、被取代的或未被取代的、飽和的或不飽和的具有1-15個碳原子的脂族基團，并且任選地具有一個或多個選自O、N或S的雜原子；

W是6元被取代的或未被取代的芳族環或雜環基團；

Z是鍵或基團，所述基團包含分支的或未分支的、被取代的或未被取代的、飽和的或不飽和的具有1-30個碳原子的脂族基團，并且任選地具有一個或多個選自O、N或S的雜原子，

每個R¹獨立地選自H、-O-甲基、-O-乙基、-O-正丙基、-O-異丙基;?-O-正丁基、-O-仲丁基或-O-異丁基；具有1-4個碳原子的-S-烷基；

V是鍵、被取代的或未被取代的具有1-4個碳原子的烷基、或被取代的或未被取代的-O-烷基，其中所述烷基或-O-烷基被C₁-C₄烷基取代；

R³是酶底物，其選自磷酸基團、酯基、酰胺基、硫酸基團、糖苷基團、脲基團和硝基；

n是在1-25范圍內的整數，且

q是1；

s是在1-2范圍內的整數；且

t是1。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一檢測試劑包含(i)對所述第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體復合物的暴露的半抗原具有特異性的第二抗體，所述第二抗體綴合至第一酶，使得所述第二抗體用所述第一酶標記所述第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體復合物；和(ii)所述第一酶的第一底物。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第一底物是生色底物或熒光底物。

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一檢測試劑包括擴增組分以用多個第一報告物部分標記所述第一蛋白靶標-暴露的半抗原-抗體綴合物復合物的暴露的半抗原。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述多個第一報告物部分是半抗原。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述第一檢測試劑進一步包含對所述多個第一報告物部分具有特異性的第二抗體，每個第二抗體綴合至第二報告物部分。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述第二報告物部分選自擴增酶或熒光團。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述第二報告物部分是擴增酶，且其中所述第一檢測試劑進一步包含所述擴增酶的第一生色底物或熒光底物。