[發(fā)明專利]用于碳水化合物毛細(xì)管電泳分析的基于三重內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的聚糖結(jié)構(gòu)分配方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780060506.3
• 申請日: 2017-08-17
• 公開（公告）號: CN109804244B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: G·賈爾瓦斯;M·G·西蓋蒂;A·格特曼;J·查普曼
• 申請（專利權(quán)）人: DH科技發(fā)展私人貿(mào)易有限公司
• 主分類號: G01N33/487
• 分類號: G01N33/487;G01N27/447;G01N21/33;G01N30/88
• 代理公司: 中國貿(mào)促會專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 馬景輝

本發(fā)明揭示一種分離裝置，其接收與三種不同的麥芽低聚糖MOL的低聚物共注射的已知或未知聚糖。檢測器將所述分離的聚糖及所述分離的三種不同的低聚物測量為強度峰值，所述強度峰值為遷移時間的函數(shù)。根據(jù)所述三種不同低聚物的所述遷移時間計算多個其它MOL低聚物的所述遷移時間。通過比較其遷移時間與所述多個其它MOL低聚物的所述所計算遷移時間來計算所述分離的聚糖的所述強度峰值的葡萄糖單位GU值。所述處理器通過將所述分離的聚糖的所述強度峰值的所述所計算的GU值與已知聚糖結(jié)構(gòu)的GU值的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較來識別所述聚糖的所述結(jié)構(gòu)。

相關(guān)申請案的交叉參考

本申請案主張2016年8月26日提交申請的美國臨時專利申請案第62/380,062號及在2017年6月12日提交申請的美國臨時專利申請案第62/518,104號之權(quán)益，所述兩個美國臨時專利申請案的內(nèi)容以全文引用的方式并入本文中。

背景技術(shù)

本文中的教示涉及使用分離技術(shù)(例如毛細(xì)管電泳或液相色譜)識別樣本中的碳水化合物或任何聚糖的結(jié)構(gòu)。更特定來說，本文中的教示涉及用于使用共注射用于葡萄糖單位(GU)計算的三重內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)來識別聚糖的結(jié)構(gòu)的系統(tǒng)及方法，其減輕此計算對麥芽低聚糖階梯的伴隨運行的需要。劃界標(biāo)準(zhǔn)為共注射，而內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)為樣本的部分。本文中的系統(tǒng)及方法可結(jié)合處理器、控制器或計算機系統(tǒng)(例如圖1的計算機系統(tǒng))執(zhí)行。

葡萄糖單位(GU)計算

碳水化合物為自然界中結(jié)構(gòu)最多樣的生物聚合物之一，因此構(gòu)成重大的分析挑戰(zhàn)。即使使用液相色譜(LC)、毛細(xì)管電泳(CE)、多毛細(xì)管電泳、質(zhì)譜(MS)及核磁共振光譜(NMR)或其一些組合的最強大生物分析技術(shù)，可能的聚糖結(jié)構(gòu)的極高多樣性使得其結(jié)構(gòu)解析非常困難。聚糖為任何多糖或寡糖，尤其為糖蛋白或糖脂的部分。截至2017年3月23日的https://en.wikipedia.org/wiki/Glycan。碳水化合物為糖類，其為一種類型的聚糖或可為聚糖的部分。截至2017年3月23日的https://en.wikipedia.org/wiki/Carbohydrate。

基于LC及CE的糖組學(xué)方法經(jīng)常用于糖分析領(lǐng)域。在這兩種技術(shù)中，葡萄糖單元(GU)計算為基于數(shù)據(jù)庫搜索的結(jié)構(gòu)分配的普遍方法。葡萄糖單元的方法是基于未知分析物峰值的遷移時間與增加大小的寡糖結(jié)構(gòu)的混合物(通常在文獻(xiàn)中被稱為“階梯”)的直接比較以輔助結(jié)構(gòu)解析。

例如，在CE或LC中，麥芽低聚糖(MOL)階梯用于此目的。階梯包括葡萄糖單位(例如但不限于，α1-4、α1-6、β1-4、β1-6、β等鏈接單元)，其中其聚合度(DP)的范圍從單一到數(shù)十個不等。CE為一種非常強大的分離技術(shù)，但不使用額外的分析維度，例如基于外切糖苷酶的降解分析或質(zhì)譜分析，其不提供直接的結(jié)構(gòu)信息，除非伴隨與聚糖結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫有關(guān)的GU計算。

然而，GU值計算的準(zhǔn)確性很大程度上取決于洗脫/遷移時間測量的精確度，且實際上所有液相分離方法都受到洗脫/遷移時間及不同寡糖結(jié)構(gòu)的可能的共洗脫/遷移的影響。將遷移時間轉(zhuǎn)換為相對遷移時間可提高精度。此外，關(guān)于樣本的先驗信息可幫助避免數(shù)據(jù)誤解。GU方法旨在成為系統(tǒng)獨立的，作為糖生物學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)解析方法。盡管其在色譜領(lǐng)域已確立了很好的作用，但基于CE的數(shù)據(jù)處理及解釋仍處于早期階段。

實際上，手動GU計算是在發(fā)布計算機程序以執(zhí)行此任務(wù)之前的一個耗時過程。這些計算機程序中的一些提供了出色的多通道CE遷移時間對準(zhǔn)，解決樣本間遷移時間偏移以及電泳圖的拉伸/壓縮，但沒有解決GU值計算及隨后結(jié)構(gòu)分配。

在典型的基于CE的GU方法實驗中，制備一或多個MOL標(biāo)準(zhǔn)樣本以及每一已知或未知聚糖樣本。首先用CE分離MOL標(biāo)準(zhǔn)樣本。使用連接到CE裝置的檢測器檢測低聚物的強度峰值。檢測器采用的檢測方法可包含但不限于熒光檢測、紫外光檢測或質(zhì)譜。從MOL標(biāo)準(zhǔn)樣本檢測的低聚物的強度峰值經(jīng)檢測為隨遷移時間變化。