[發(fā)明專利]在不存在誘導底物下絲狀真菌細胞中的蛋白產(chǎn)生

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780059992.7
• 申請日: 2017-10-03
• 公開（公告）號: CN109790510A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設計）人: M·華德;Y·羅;F·O·本德蘇;M·瓦爾科寧;M·薩羅海摩;N·阿羅;T·帕庫拉
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司;芬蘭VTT技術研究中心有限公司
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N9/42;C12N15/80;C07K14/37;C12P21/02;C12N1/14
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 胡志君;黃革生

1.一種衍生自親本絲狀真菌細胞的變體絲狀真菌細胞，所述變體細胞包含編碼Ace3蛋白的引入的多核苷酸構建體，所述Ace3蛋白包含與SEQ ID NO:6的Ace3蛋白約90％序列同一性，其中相對于所述親本細胞，所述變體細胞在不存在誘導底物的情況下產(chǎn)生增加量的目的蛋白(POI)，其中所述變體和親本細胞在相似條件下培養(yǎng)。

2.如權利要求1所述的變體細胞，其中相對于所述親本細胞，所述變體細胞在存在誘導底物的情況下產(chǎn)生增加量的目的蛋白(POI)，其中所述變體和親本細胞在相似條件下培養(yǎng)。

3.如權利要求1所述的變體細胞，其中所述POI是內源POI或異源POI。

4.如權利要求1所述的變體細胞，其中所述變體細胞包含編碼異源POI的引入的多核苷酸構建體。

5.如權利要求3所述的變體細胞，其中所述內源POI是木質纖維素降解酶。

6.如權利要求5所述的變體細胞，其中所述木質纖維素降解酶選自由纖維素酶、半纖維素酶、或其組合組成的組。

7.如權利要求5所述的變體細胞，其中所述木質纖維素降解酶選自由cbh1、cbh2、egl1、egl2、egl3、egl4、egl5、egl6、bgl1、bgl2、xyn1、xyn2、xyn3、bxl1、abf1、abf2、abf3、axe1、axe2、axe3、man1、agl1、agl2、agl3、glr1、swo1、cip1和cip2組成的組。

8.如權利要求3所述的變體細胞，其中所述異源POI選自由以下組成的組：α-淀粉酶、堿性α-淀粉酶、β-淀粉酶、纖維素酶、葡聚糖酶、α-葡糖苷酶、α-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、半纖維素酶、戊聚糖酶、木聚糖酶、轉化酶、乳糖酶、柚皮苷酶、果膠酶、支鏈淀粉酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、皺胃酶、高血壓蛋白原酶、凝乳酶、枯草桿菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶、酯酶、磷脂酶、磷酸酶、植酸酶、酰胺酶、亞氨基酰化酶、谷氨酰胺酶、溶菌酶、青霉素酰化酶；異構酶、氧化還原酶、過氧化氫酶、氯過氧化物酶、葡萄糖氧化酶、羥基類固醇脫氫酶、過氧化物酶、裂解酶、天冬氨酸β-脫羧酶、富馬酸酶、組氨酸酶、轉移酶、連接酶、氨肽酶、羧肽酶、幾丁質酶、角質酶、脫氧核糖核酸酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酶、漆酶、甘露糖苷酶、齒斑葡聚糖酶(mutanase)、多酚氧化酶、核糖核酸酶和轉谷氨酰胺酶。

9.如權利要求1所述的變體細胞，其中將所述多核苷酸構建體整合到所述真菌細胞基因組中。

10.如權利要求9所述的變體細胞，其中將所述多核苷酸構建體整合到所述真菌細胞基因組的端粒位點中。

11.如權利要求9所述的變體細胞，其中將所述多核苷酸構建體整合到所述真菌細胞基因組的葡糖淀粉酶(gla1)基因座中。

12.如權利要求1所述的變體細胞，其中所述多核苷酸構建體包含核苷酸序列，所述核苷酸序列包含與SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:13約90％序列同一性。

13.如權利要求1所述的變體細胞，其中所述編碼的Ace3蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含與SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14 95％序列同一性。

14.一種編碼Ace3蛋白的多核苷酸ORF，所述Ace3蛋白包含與SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:14約90％序列同一性。