[發(fā)明專利]解除有用蝦類的卵成熟抑制的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780057737.9
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN109715806B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜奉廷;瑪茜·維爾德
• 申請（專利權(quán)）人: 國立研究開發(fā)法人國際農(nóng)林水產(chǎn)業(yè)研究中心
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A01K61/59;A01K67/033
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 紀(jì)秀鳳

一種解除養(yǎng)殖蝦類的卵成熟抑制的方法。本發(fā)明的目的在于提供使用RNA干涉的手法抑制蝦類的卵成熟抑制基因的表達(dá)，從而解除卵成熟抑制的方法。具體而言，本發(fā)明為使用以養(yǎng)殖蝦類的卵黃生成抑制激素(VIH)基因的mRNA為靶的雙鏈RNA(dsRNA)，通過RNA干涉法，抑制蝦類的卵黃生成抑制激素基因的表達(dá)，從而解除養(yǎng)殖蝦類的卵成熟抑制的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用分子生物學(xué)手法控制蝦類的機(jī)體內(nèi)原來的生物學(xué)功能的方法，具體而言，涉及使用RNA干涉的手法抑制蝦類的卵成熟抑制基因的表達(dá)，從而解除卵成熟抑制的方法。

背景技術(shù)

當(dāng)前，為了支援每年高達(dá)350萬噸的凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)，世界上每年約生產(chǎn)2,000億尾幼蝦，作為其母蝦僅美國夏威夷州就生產(chǎn)·輸出80萬尾。人為地使包括凡納濱對蝦的對蝦類成熟十分困難，目前進(jìn)行眼柄切除來促進(jìn)成熟。然而，眼柄切除不僅成熟成功率低，而且由于燒斷蝦的一邊的眼柄，因此還遭到虐待動(dòng)物的責(zé)難。開發(fā)代替眼柄切除的成熟促進(jìn)技術(shù)，使計(jì)劃地、有效地生產(chǎn)幼蝦成為可能是緊迫的課題。

RNA干涉(RNAi)是通過雙鏈RNA(dsRNA)序列特異性地切斷mRNA，結(jié)果抑制基因表達(dá)的現(xiàn)象，據(jù)報(bào)告是生物共通的核酸級別的防御系統(tǒng)(參照非專利文獻(xiàn)1)。在RNAi中，dsRNA通過Dicer酶(一種核糖核酸內(nèi)切酶)的作用被加工生成siRNA(short interfering RNA：小干擾RNA)，siRNA作為引導(dǎo)RNA來識別靶序列，通過切斷靶mRNA，抑制基因的表達(dá)。

當(dāng)前，還沒有為了在孵化場等人為地使蝦類成熟·產(chǎn)卵來代替切除眼柄的技術(shù)。然而，近來報(bào)告以使用RNA干涉法在斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)等蝦類中抑制VIH的表達(dá)為目的的研究事例(參照非專利文獻(xiàn)1、非專利文獻(xiàn)2以及非專利文獻(xiàn)3)。此外，還有宣稱能夠用相同的方法促進(jìn)成熟的專利申請的事例(參照專利文獻(xiàn)1)。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：美國專利申請公開第US2015/0099702號說明書。

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：Tiu and Chan,2007,FEBS Journal,274:4385-4395.

非專利文獻(xiàn)2：Treerattrakool et al.,2008,FEBS Journal,275:970-980.

非專利文獻(xiàn)3：Treerattrakool et al.,2013,Aquaculture,404-405:116-121.

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明要解決的課題

本發(fā)明的目的在于提供使用RNA干涉的手法抑制蝦類的卵成熟抑制基因的表達(dá)，從而解除卵成熟抑制的方法。

用于解決課題的手段

作為控制蝦類的卵成熟的方法，本發(fā)明者們對利用RNA干涉的原理，使用與抑制蝦類的卵成熟的基因的mRNA結(jié)合的dsRNA，抑制蝦類的卵成熟抑制基因的表達(dá)進(jìn)行了深入研究。該研究是基于生化學(xué)研究的為使有效控制成熟成為可能的第一步，而且是解除機(jī)體內(nèi)抑制成熟的激素的基因表達(dá)的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過上述dsRNA，能夠有效地抑制蝦類的卵成熟抑制基因的表達(dá)，從而能夠解除卵成熟的抑制。

進(jìn)而，本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)，多個(gè)基因與卵成熟的抑制相關(guān)，通過混合使用能夠抑制各個(gè)基因表達(dá)的多個(gè)dsRNA，能夠更有效地抑制卵成熟抑制基因的表達(dá)，以至于完成本發(fā)明。

即，本發(fā)明如下所示。

[1]一種解除養(yǎng)殖蝦類的卵成熟抑制的方法，其使用以養(yǎng)殖蝦類的卵黃生成抑制激素(VIH)基因的mRNA為靶的雙鏈RNA(dsRNA)，通過RNA干涉法，抑制蝦類的卵黃生成抑制激素基因的表達(dá)。