[發(fā)明專利]確定雄性配子細胞的基因型

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780056632.1
• 申請日: 2017-06-27
• 公開（公告）號: CN109714952A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: W.M.克里斯曼尼;K.戴;G.D.梅;J.A.沙利斯;云月
• 申請（專利權(quán)）人: 先鋒國際良種公司
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00;C12Q1/6895;A01H1/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 翟建偉;周齊宏

1.一種用于非破壞性獲得小孢子的基因型的方法，所述方法包括：

a.分離包含四個四分體小孢子的小孢子四分體，

b.分開所述小孢子四分體以獲得四個四分體小孢子，

c.對所述四個四分體小孢子中的三個進行基因分型；和

d.從步驟(c)中獲得的基因型推斷第四四分體小孢子的基因型。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述小孢子四分體來自玉蜀黍。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述小孢子四分體來自卡諾拉油菜。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述小孢子四分體在(b)中機械地分開，以獲得四個四分體小孢子。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中使用顯微操縱器或細胞分選器將所述小孢子四分體機械地分開。

6.如權(quán)利要求4所述的方法，其中使用微流體系統(tǒng)將所述小孢子四分體機械地分開。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述小孢子四分體在(b)中化學地分開，以獲得四個四分體小孢子。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括在步驟(b)之后分離所述第四四分體小孢子。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述在對三個四分體小孢子進行基因分型之前，進行完整基因組擴增。

10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中對三個四分體小孢子進行單獨地基因分型，或者將qPCR應用于三個四分體小孢子的合并樣品中。

11.如權(quán)利要求1所述的方法，其進一步包括基于以下來選擇所述第四四分體小孢子：在至少一個基因座處的優(yōu)選的基因型，完整基因組基因型，全基因組基因型，來自不同物種的至少一個染色體，包括但不限于簡單性狀和復雜性狀的目的性狀，突變，基因敲除、缺失或沉默，轉(zhuǎn)基因基因座，重組單體型，另一基因型的遺傳互補物，或其任何組合。

12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中將所選擇的第四四分體小孢子與染色體加倍劑接觸以獲得加倍小孢子。

13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中單倍體胚是從所述所選擇的第四四分體小孢子產(chǎn)生的。

14.如權(quán)利要求12所述的方法，其進一步包括從所述加倍小孢子產(chǎn)生雙單倍體胚。

15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中將所述單倍體胚與染色體加倍劑接觸以產(chǎn)生雙單倍體胚。

16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述染色體加倍劑是秋水仙堿。

17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述染色體加倍劑是秋水仙堿。

18.如權(quán)利要求14所述的方法，其進一步包括使所述雙單倍體胚生長成雙單倍體植物。

19.如權(quán)利要求15所述的方法，其進一步包括使所述雙單倍體胚生長成雙單倍體植物。

20.如權(quán)利要求11所述的方法，其進一步包括使用所選擇的第四四分體小孢子來使雌性配子細胞受精。