[發(fā)明專利]調(diào)節(jié)重組蛋白生產(chǎn)狀況的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780055694.0
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN109715786A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發(fā)明（設計）人: J-M·比爾瑟;C·德斯莫格特
• 申請（專利權(quán)）人: 阿雷斯貿(mào)易股份有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12P1/00;C07K16/18
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎;江磊

本發(fā)明涉及在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)表達重組蛋白的宿主細胞的方法和組合物，所述細胞培養(yǎng)基補充了包含有效量戊酸的補料，由此，相比不用含戊酸補料條件下生長的細胞，細胞活力提高且所述蛋白質(zhì)的生產(chǎn)增加。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞培養(yǎng)領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明涉及在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)表達重組蛋白的宿主細胞的方法，所述細胞培養(yǎng)基補充了包含有效量戊酸的補料，從而使得所述宿主細胞的活力和所述蛋白質(zhì)的生產(chǎn)高于無戊酸補料培養(yǎng)的細胞。

背景技術(shù)

過去20年中，生物制藥公司致力于尋找能夠促進細胞生長和重組蛋白生產(chǎn)力的化合物。許多作者報道稱小分子添加劑對比生產(chǎn)力有積極影響，通常是因為它們將細胞培養(yǎng)物阻留在G0期[1]，這正是對生產(chǎn)而言最重要的相期。其中，羧酸對于培養(yǎng)物的表現(xiàn)有最大影響。它們被發(fā)現(xiàn)抑制HDAC1活性(組蛋白去乙酰化酶1)[2]。但是，在培養(yǎng)過程中添加化合物，既便可能提高效價，通常會降低質(zhì)量。這些化合物還會有細胞毒性和凋亡活性。因此，許多方案意圖通過比較不同的羧酸并研究它們對于效價和質(zhì)量的影響來尋找對蛋白質(zhì)危害更低的添加劑。

所以，需要能夠安全培養(yǎng)宿主細胞并增加重組蛋白生產(chǎn)的培養(yǎng)條件和生產(chǎn)方法。本發(fā)明為此提供了方法和組合物用于增加重組蛋白生產(chǎn)，同時改善宿主細胞活力。

發(fā)明概述

一方面，本發(fā)明提供一種增加重組蛋白生產(chǎn)的方法，所述方法包括在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)表達所述蛋白的宿主細胞，所述細胞培養(yǎng)基補充了至少一份包含有效量戊酸的補料。

另一方面，本發(fā)明提供一種培養(yǎng)表達重組蛋白的宿主細胞的方法，所述方法包括在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述宿主細胞，所述細胞培養(yǎng)基補充了至少一份包含有效量戊酸的補料。

另一方面，本發(fā)明提供一種補料組合物，其包含有效量的戊酸。

另一方面，本發(fā)明提供戊酸作為補料用于細胞培養(yǎng)來增加重組蛋白生產(chǎn)的用途。

另一方面，本發(fā)明提供戊酸作為誘導劑用于細胞培養(yǎng)的用途。

附圖說明

圖1顯示用不同濃度戊酸、不同補料時機培養(yǎng)的表達蛋白P1的宿主細胞的活細胞密度(A)、活力(B)和效價(C)。圖1A、1B和1C的圖例如圖1D中所述。

圖2顯示不同時機添加1.5mM戊酸來培養(yǎng)的表達抗體P2的宿主細胞的活細胞密度(A)、活力(B)和效價(C)。圖2A、2B和2C的圖例如圖2D中所述。

兩圖中：VA＝戊酸，WD＝工作日(即向細胞培養(yǎng)物中加戊酸的日子)

發(fā)明詳述

本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻都通過引用整體納入。

除非另外定義，本文所用科技術(shù)語的含義與本文主題所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。按照本文中的使用，提供以下定義以便理解本發(fā)明。

“包含”一詞在此普遍表示包括的意思，即允許存在一項或多項特征或組分。在本申請說明書和權(quán)利要求中，“包含”可包括用“由……構(gòu)成或組成”和/或“主要由……構(gòu)成或組成”之類描述的類似的實施方式。

在本申請說明書和權(quán)利要求中，“一(個)”、“一(項)”和“所述”等單數(shù)形式涵蓋復數(shù)意義，除非文中明確另有所指。“和/或”用于“A和/或B”之類表述時意在涵蓋“A和B”、“A或B”、“A”和“B”。

術(shù)語“細胞培養(yǎng)”或“培養(yǎng)”(含復數(shù))指細胞體外(in vitro)生長和繁殖，即生物體或組織之外。適合哺乳動物細胞的培養(yǎng)條件是本領(lǐng)域周知的，例如《用于制藥和細胞療法的細胞培養(yǎng)技術(shù)》(Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-BasedTherapies)(2005)[3]中所授。哺乳動物細胞可懸浮培養(yǎng)或于固體基材上貼附培養(yǎng)。