[發明專利]數字計數方法的改進

有效

• 申請號: 201780054520.2
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN109661580B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: A·H·昆丁
• 申請（專利權）人: 塞爾瑪生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;B01L3/00;C12Q1/686
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 張小勇

1.用于減少在可能包含至少一種分析物的樣品的單分子數字計數分析中的假陽性檢測和/或背景噪音的方法，其中所述的樣品已經與具有多個離散捕獲位點的固相接觸，每個位點能夠捕獲所述的至少一種分析物，所述的方法包括至少兩個檢測循環，其中用標記試劑標記或重新標記相同的分析物，其中每個檢測循環包括以下步驟：

a)觸發來自被捕獲的和標記的或重新標記的分析物的信號，

b)記錄顯示來自所述的被捕獲的和標記的或重新標記的分析物的信號的捕獲位點的數量和位置，

c)并且在執行進一步的檢測循環之前，使信號失活，

其中使信號失活的步驟選自：

i.從所述的捕獲的分析物脫離并除去所述的標記試劑，

ii.使所述的標記試劑促進信號的能力失活，或者

iii.i和ii的組合。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述的樣品和所述的具有多個離散捕獲位點的固相在捕獲所述的至少一種分析物之前或期間被分隔。

3.根據權利要求1所述的方法，其中被捕獲的分析物和標記試劑在標記所述的至少一種分析物之前或期間被分隔。

4.根據權利要求1所述的方法，其中通過在步驟a)之前的每個檢測循環中的標記步驟中添加標記試劑來標記所述的分析物。

5.根據權利要求1所述的方法，其中通過在所述的固相上捕獲所述的分析物之前或期間在標記步驟中添加標記試劑來標記所述的被捕獲的分析物，并且其中在執行進一步的檢測循環之前進行步驟c)然后進行重新標記步驟，其中通過添加所述的標記試劑來標記所述的被捕獲的分析物。

6.根據權利要求1所述的方法，其中將所述的被捕獲的和標記的分析物分隔以產生包含至少一種分析物的液體分隔區。

7.根據權利要求1所述的方法，其包括假陽性檢測循環，其中所述的樣品包含或可能包含靶分析物和非靶化合物，其中用第一標記試劑標記所述的靶分析物，其中在所述的標記步驟中應用第二標記試劑代替所述的第一標記試劑，其中所述的非靶化合物由所述的第二標記試劑標記的標記效率為L₁，其中所述的靶分析物由所述的第二標記試劑標記的標記效率為L₂并且L₁≥L₂。

8.根據權利要求7所述的方法，其中在所述的樣品中存在的非靶化合物的數量是從在所述的假陽性檢測循環中顯示信號的捕獲位點的數量估計的。

9.根據權利要求8所述的方法，其中在所述的樣品中存在的靶分析物的數量是從在所述的假陽性檢測循環之前的所有檢測循環中重復顯示信號的捕獲位點的數量和從在所述的樣品中存在的非靶化合物的估計數量估計的。

10.根據權利要求1所述的方法，所述方法包括假陽性檢測循環，其中所述的假陽性檢測循環不包括任何標記步驟。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述的標記試劑包括檢測模塊，并且其中所述的觸發信號的步驟是通過將檢測試劑遞送至所述的檢測模塊進行的。

12.根據權利要求1所述的方法，其中所述的使信號失活的步驟之后進行漂洗步驟。

13.根據權利要求1所述的方法，其中從所述的樣品捕獲所述的至少一種分析物是通過固定化在所述的固相上進行的。

14.根據權利要求1所述的方法，其中從所述的樣品捕獲所述的至少一種分析物是通過使用對所述的分析物具有特異性的一種或多種捕獲探針進行的，并且其中所述的捕獲探針附著于所述的固相。

15.根據權利要求1所述的方法，其中通過從所述的被捕獲的分析物脫離而使所述的標記試劑失活并通過沖洗除去。