[發明專利]半胱氨酸工程化III型纖連蛋白結構域結合分子

在審

• 申請號: 201780051351.7
• 申請日: 2017-06-21
• 公開（公告）號: CN109689080A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: M.安德森;R.阿塔;M.迪姆;S.戈德伯格;L.玄;S.雅各布斯;A.金;D.克萊因;S.摩爾斯;K.奧奈爾;K.皮查
• 申請（專利權）人: 詹森生物科技公司
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K38/39;C07K14/78;C07K16/28;C12N15/09
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;黃希貴

1. 一種分離的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其包含在選自FN3結構域的殘基6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89、90、91和93的位置處的至少一個半胱氨酸取代，其中所述FN3結構域基于SEQ ID NO:1。

2. 根據權利要求1所述的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其中所述半胱氨酸取代位于選自SEQ ID NO:111-114或122-137的殘基6、8、10、11、14、15、16、20、30、34、38、40、41、45、47、48、53、54、59、60、62、64、70、88、89、90、91和93的位置處。

3. 一種分離的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列，其中至少一個半胱氨酸取代來自SEQ ID NO:27的氨基酸序列，其中所述分離的經半胱氨酸改造的FN3結構域特異性地結合表皮生長因子受體(EGFR)并阻礙表皮生長因子(EGF)與EGFR的結合。

4. 一種分離的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列，其中至少一個半胱氨酸取代來自SEQ ID NO:114的氨基酸序列，其中所述分離的經半胱氨酸改造的FN3特異性地結合肝細胞生長因子受體(c-Met)并阻礙肝細胞生長因子(HGF)與c-Met的結合。

5.根據權利要求1所述的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其還包含半衰期延長部分。

6.根據權利要求5所述的經半胱氨酸改造的III型纖連蛋白(FN3)結構域，其中所述半衰期延長部分為結合白蛋白的分子、聚乙二醇(PEG)，或免疫球蛋白的Fc區的至少一部分。

7.一種制備經半胱氨酸改造的FN3結構域的方法，其包括：

(i) 通過用編碼半胱氨酸氨基酸殘基的核苷酸殘基替換一個或多個核苷酸殘基來誘變親本FN3結構域的核酸序列，以編碼所述經半胱氨酸改造的FN3結構域；

(ii) 表達所述經半胱氨酸改造的FN3結構域；以及

(iii) 回收所述經半胱氨酸改造的FN3結構域。

8. 根據權利要求7所述的方法，其中所述FN3結構域基于SEQ ID NO:1，并且所述誘變步驟包括進行定點誘變。

9.根據權利要求8所述的方法，其包括在大腸桿菌(E.coli)中表達所述經半胱氨酸改造的FN3結構域。

10.根據權利要求8所述的方法，其還包括在所述回收步驟之后：將所述經半胱氨酸改造的FN3結構域與硫醇反應性化學試劑反應，以生成化學綴合的經半胱氨酸改造的FN3結構域。

11.根據權利要求10所述的方法，其還包括在所述反應步驟之后，測量所述化學綴合的經半胱氨酸改造的FN3結構域的EGFR結合。

12.根據權利要求11所述的方法，其還包括在所述反應步驟之后，在添加所述化學綴合的經半胱氨酸改造的FN3結構域之后測量EGFR過表達腫瘤細胞系的細胞生長的抑制。

13.根據權利要求11所述的方法，其還包括在所述反應步驟之后，測量所述化學綴合的經半胱氨酸改造的FN3結構域的c-Met結合。

14.根據權利要求11所述的方法，其還包括在所述反應步驟之后，在添加所述化學綴合的經半胱氨酸改造的FN3結構域之后測量c-Met表達腫瘤細胞系的細胞生長的抑制。