[發(fā)明專利]使用可編程DNA結(jié)合蛋白增強(qiáng)靶向基因組修飾有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780048469.4 | 申請日： | 2017-02-20 |
| 公開（公告）號： | CN109983124B | 公開（公告）日： | 2022-09-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | F.陳 | 申請（專利權(quán)）人： | 西格馬－奧爾德里奇有限責(zé)任公司 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C07K14/00;C12N9/10;G01N33/50;G01N33/58 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 初明明;周齊宏 |
| 地址： | 美國密*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 使用 可編程 dna 結(jié)合 蛋白 增強(qiáng) 靶向 基因組 修飾 | ||
1.一種組合物，其包含：
(a) RNA引導(dǎo)的成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)(CRISPR)核酸酶系統(tǒng)或編碼所述CRISPR核酸酶系統(tǒng)的核酸，其中所述CRISPR核酸酶系統(tǒng)包含(i) 可編程DNA修飾蛋白，其為CRISPR蛋白，和(ii) 引導(dǎo)RNA；和
(b) 至少一種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)或編碼所述至少一種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)的核酸，其中每種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)包含(i) 可編程DNA結(jié)合蛋白，其是無催化活性的CRISPR蛋白，和(ii) 引導(dǎo)RNA；和其中
(x) 所述可編程DNA修飾蛋白是II型CRISPR蛋白，和所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白是II型CRISPR蛋白，或
(y) 所述可編程DNA修飾蛋白是V型CRISPR蛋白，和所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白是II型CRISPR蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中(i) 所述II型CRISPR蛋白選自新兇手弗朗西斯菌CRISPR-Cas9(FnCas9)、空腸彎曲桿菌CRISPR-Cas9(CjCas9)和釀膿鏈球菌CRISPR-Cas9(SpCas9)；和/或(ii) 所述V型CRISPR蛋白是新兇手弗朗西斯菌CRISPR-Cpf1(FnCpf1)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白是Cas9 II型CRISPR蛋白，其中所述Cas9蛋白在RuvC樣結(jié)構(gòu)域和HNH樣結(jié)構(gòu)域的每一個中具有一個或多個突變。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中(i) RuvC樣結(jié)構(gòu)域中的一個或多個突變是D10A、D8A、E762A和/或D986A；和/或(ii) HNH樣結(jié)構(gòu)域中的一個或多個突變是H840A、H559A、N854A、N856A和/或N863A。
5.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的組合物，其中編碼每種CRISPR蛋白的核酸是mRNA或DNA。
6.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的組合物，其中編碼每種CRISPR蛋白的核酸是質(zhì)粒載體或病毒載體的一部分。
7.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的組合物，其中編碼每種引導(dǎo)RNA的核酸是質(zhì)粒載體或病毒載體的一部分。
8.根據(jù)任何前述權(quán)利要求所述的組合物，其中每種CRISPR系統(tǒng)的引導(dǎo)RNA是(a)酶促合成的，或(b)至少部分是化學(xué)合成的。
9.一種試劑盒，其包含權(quán)利要求1至8中任一項的組合物。
10.一種用于提高真核細(xì)胞中靶向基因組修飾效率和/或特異性的體外方法，所述方法包括向真核細(xì)胞中引入組合物，所述組合物包含：
(a) RNA引導(dǎo)的成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)(CRISPR)核酸酶系統(tǒng)或編碼所述CRISPR核酸酶系統(tǒng)的核酸，其中所述CRISPR核酸酶系統(tǒng)包含(i) 可編程DNA修飾蛋白，其為CRISPR蛋白，和(ii) 引導(dǎo)RNA；和
(b) 至少一種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)或編碼所述至少一種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)的核酸，其中每種無催化活性的CRISPR系統(tǒng)包含(i) 可編程DNA結(jié)合蛋白，其是無催化活性的CRISPR蛋白，和(ii) 引導(dǎo)RNA；和其中
(x) 所述可編程DNA修飾蛋白是II型CRISPR蛋白，和所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白是II型CRISPR蛋白，或
(y) 所述可編程DNA修飾蛋白是V型CRISPR蛋白，和所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白是II型CRISPR蛋白；
其中所述可編程DNA修飾蛋白靶向于靶染色體序列，并且至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白中的每種都靶向于靶染色體序列附近的位點，并且所述至少一種可編程DNA結(jié)合蛋白與靶染色體序列附近位點的結(jié)合提高可編程DNA修飾蛋白對靶染色體序列的可及性，從而提高靶向基因組修飾效率和/或特異性。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于西格馬－奧爾德里奇有限責(zé)任公司，未經(jīng)西格馬－奧爾德里奇有限責(zé)任公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201780048469.4/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
