[發(fā)明專利]重組蛋白的生產(chǎn)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780047981.7
• 申請(qǐng)日: 2017-08-02
• 公開（公告）號(hào): CN109563531A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 倉知建始;木下美保子
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 絲芭博株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12P21/02
• 分類號(hào): C12P21/02;C12N1/00
• 代理公司: 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 魯雯雯;金龍河

1.一種重組蛋白的生產(chǎn)方法，其為使用在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)重組蛋白的重組細(xì)胞的該重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，

包括在使所述重組細(xì)胞增殖后的培養(yǎng)液的一部分中添加新鮮的培養(yǎng)基并連續(xù)地進(jìn)行培養(yǎng)的步驟，

不重復(fù)使用誘導(dǎo)了所述重組蛋白的表達(dá)的重組細(xì)胞。

2.如權(quán)利要求1所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述重組細(xì)胞的增殖和所述重組蛋白的表達(dá)的誘導(dǎo)在不同的培養(yǎng)槽中進(jìn)行。

3.如權(quán)利要求1或2所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述重組細(xì)胞的增殖通過流加培養(yǎng)進(jìn)行。

4.一種重組蛋白的生產(chǎn)方法，其為使用在誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)重組蛋白的重組細(xì)胞的該重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，

包括重復(fù)進(jìn)行下述(A)～(E)步驟：

(A)通過分批培養(yǎng)或流加培養(yǎng)使所述重組細(xì)胞在培養(yǎng)槽中增殖的步驟；

(B)在(A)步驟中的增殖后，將所述培養(yǎng)槽的培養(yǎng)液的一部分轉(zhuǎn)移至接收用培養(yǎng)槽中的步驟；

(C)在(B)步驟中的轉(zhuǎn)移后，在兩個(gè)培養(yǎng)槽中的任意一個(gè)中添加新鮮的培養(yǎng)基，進(jìn)入(A)步驟的步驟；

(D)在(C)步驟中未進(jìn)入(A)步驟的另一個(gè)培養(yǎng)槽中誘導(dǎo)所述重組蛋白的表達(dá)，使所述重組蛋白蓄積的步驟；

(E)從培養(yǎng)液中分離和純化(D)步驟中蓄積的所述重組蛋白的步驟。

5.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，在所述重組細(xì)胞的增殖達(dá)到對(duì)數(shù)生長期的中期時(shí)，開始所述重組蛋白的表達(dá)的誘導(dǎo)。

6.如權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述重組蛋白的表達(dá)的誘導(dǎo)通過在培養(yǎng)液中添加表達(dá)誘導(dǎo)劑、或者改變培養(yǎng)液的溫度來進(jìn)行。

7.如權(quán)利要求4所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，以培養(yǎng)液總量為基準(zhǔn)，在(B)步驟中轉(zhuǎn)移至接收用培養(yǎng)槽中的培養(yǎng)液的量為80～99體積％。

8.如權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述重組細(xì)胞為編碼所述重組蛋白的基因被整合至染色體中的細(xì)胞。

9.如權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述重組蛋白為結(jié)構(gòu)蛋白。

10.如權(quán)利要求9所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述結(jié)構(gòu)蛋白為來源于選自由角蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白、節(jié)肢彈性蛋白、蠶絲和蛛絲組成的組中的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)。

11.如權(quán)利要求1～10中任一項(xiàng)所述的重組蛋白的生產(chǎn)方法，其中，所述誘導(dǎo)型啟動(dòng)子為選自T7啟動(dòng)子、tac啟動(dòng)子、trc啟動(dòng)子、lac啟動(dòng)子和lacUV5啟動(dòng)子中的IPTG誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、或者選自PR啟動(dòng)子和PL啟動(dòng)子中的溫度誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。