[發明專利]分化細胞的制造方法和用于該制造方法的培養袋

在審

• 申請號: 201780047084.6
• 申請日: 2017-07-28
• 公開（公告）號: CN109563466A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 駒澤梢;樋口達也;金子新;安井裕
• 申請（專利權）人: 大金工業株式會社;國立大學法人京都大學
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/00;C12N5/071;C12N5/0735;C12N5/10;C12N5/074
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 龍淳

本發明的課題在于，提供一種與現有的使用培養皿的方法相比能夠以更大規模且在封閉系統中進行EB法的方法。該方法是利用類胚體(EB)法由多能干細胞制造分化細胞的方法，包括：(1)通過使用內側表面具有全氟聚合物的培養袋培養多能干細胞而形成類胚體的工序；和(2)通過使上述工序(1)中得到的類胚體所含的多能干細胞誘導分化而得到分化細胞的工序。

技術領域

本發明涉及分化細胞的制造方法和用于該制造方法的培養袋。

背景技術

具有分化成各種細胞的能力的多能干細胞(pluripotent stem cell)在臨床和藥品開發研究等中的利用受到了期待。作為多能干細胞，進行了關于人工多能干細胞(induced Pluripotent Stem cell：iPS cell)和胚胎干細胞(Embryonic Stem cell：EScell)的利用的研究。

利用多能干細胞時，要求誘導分化成所希望的分化細胞的有效的方法。多能干細胞的誘導分化頻繁使用所謂的類胚體(EB)法，該類胚體(EB)法通過利用低粘接性的培養皿(Schale)進行培養，使多能干細胞自然凝集而形成三維的塊的類胚體(Embryoid Body：EB)。在類胚體的培養中，通過添加具有分化誘導作用的細胞因子、增殖因子或其他的化合物等，能夠提高向目標細胞種的誘導效率。

在EB法中，目前作為非附著性的培養皿(Schale)，使用了涂敷有2－甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿等的具有磷脂類似結構的親水性聚合物或水凝膠等的低粘接性的培養皿等(專利文獻1)。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：國際公開第2005/001019號

發明內容

發明所要解決的課題

本發明的課題在于，提供一種與現有的使用培養皿的方法相比能夠以更大規模且在封閉系統中進行EB法的方法。

用于解決課題的技術方案

本發明的發明人為了達成上述目的，反復精心研究后，首先想到了與現有的培養皿培養相比，能夠懸浮培養更大量的多能干細胞的袋培養是有利的。但是，也判明了，使用與目前能夠用于EB法的培養皿所使用的材料相同種類的材料，制造具有透氣性的培養袋是困難的。本發明的發明人進一步反復試錯后發現，通過使用內側表面具備具有充分的透氣性且超疏水性的全氟聚合物的培養袋，能夠以與現有的使用培養皿的方法相同的效率、在封閉系統中并且以更大規模進行EB法，直至完成本發明。

本發明是基于這些知識而完成的發明，具有下述的實施方式。

項1.一種利用類胚體(EB)法由多能干細胞制造分化細胞的方法，其包括：

(1)通過使用內側表面具有全氟聚合物的培養袋培養多能干細胞而形成類胚體的工序；和

(2)通過使上述工序(1)中得到的類胚體所含的多能干細胞誘導分化而得到分化細胞的工序。

項2.一種利用類胚體(EB)法將多能干細胞誘導分化的方法，其包括：

(1)通過使用內側表面具有全氟聚合物的培養袋培養多能干細胞而形成類胚體的工序；和

(2)使上述工序(1)中得到的類胚體所含的多能干細胞誘導分化的工序。

項3.如項1或2所述的方法，其中，上述全氟聚合物為選自四氟乙烯/六氟丙烯共聚物、四氟乙烯/全氟烷基乙烯基醚共聚物和四氟乙烯/六氟丙烯/全氟烷基乙烯基醚共聚物中的至少一種的全氟聚合物。

項4.如項1～3中任一項所述的方法，其中，多能干細胞為人工多能干細胞(iPS細胞)或胚胎干細胞(ES細胞)。