[發(fā)明專利]基因組編輯

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780047013.6
• 申請日: 2017-07-27
• 公開（公告）號: CN109952373A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·弗雷登斯;王開航;J·W·欽
• 申請（專利權(quán)）人: 英國研究與創(chuàng)新基金會
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/70
• 代理公司: 深圳市百瑞專利商標事務(wù)所(普通合伙) 44240
• 代理人: 金輝

1.一種方法，包括：

a)提供宿主細胞

所述宿主細胞包括附加型復(fù)制子，

所述附加型復(fù)制子包括供體核酸序列，

所述宿主細胞還包括靶標核酸，

b)提供能夠在所述宿主細胞中支持核酸重組的輔助蛋白

c)提供能夠在所述宿主細胞中支持核酸切除的輔助蛋白和/或RNA

其中所述供體核酸序列依次包括：5'-同源重組序列1-感興趣的序列-同源重組序列2-3'

其中所述感興趣的序列包括正選擇標記

d)誘導(dǎo)所述供體核酸序列的切除

e)孵育以允許切除的供體核酸和所述靶標核酸之間的重組

f)選擇已將所述供體核酸摻入所述靶標核酸的重組體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述靶標核酸依次包括：5'-同源重組序列1-負選擇標記-同源重組序列2-3'。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述選擇已將所述供體核酸摻入所述靶標核酸的重組體，包括選擇供體核酸的正選擇標記的獲得和靶標核酸的負選擇標記的丟失。

4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中同時選擇供體核酸的正選擇標記的獲得，和靶標核酸的負選擇標記的丟失。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述感興趣的序列包括正選擇標記和負選擇標記。

6.根據(jù)前述任一權(quán)利要求所述的方法，還包括步驟

dii)在靶標核酸序列中誘導(dǎo)至少一個雙鏈斷裂，其中所述雙鏈斷裂在所述同源重組序列1和所述同源重組序列2之間。

7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中在靶核酸序列中誘導(dǎo)至少兩個雙鏈斷裂，其中每個所述雙鏈斷裂在所述同源重組序列1和所述同源重組序列2之間。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述切除的供體核酸開始于所述同源重組序列1，結(jié)束于所述同源重組序列2。

9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述附加型復(fù)制子包括獨立于供體核酸序列的負選擇標記。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述方法還包括通過選擇獨立于供體核酸序列的所述負選擇標記的缺失，來選擇附加型復(fù)制子的丟失的步驟。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述附加型復(fù)制子依次包括：切除切割位點1-供體核酸序列-切除切割位點2。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述靶標核酸具有能夠在所述宿主細胞內(nèi)起作用的其自身復(fù)制起點。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述附加型復(fù)制子是質(zhì)粒核酸。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述靶標核酸是質(zhì)粒核酸。

15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的方法，其中所述附加型復(fù)制子是第一質(zhì)粒核酸，并且所述靶標核酸是第二質(zhì)粒核酸。

16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述附加型復(fù)制子是細菌人工染色體(BAC)。

17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述靶標核酸是細菌人工染色體(BAC)。

18.根據(jù)權(quán)利要求16或17的方法，其中所述附加型復(fù)制子是第一細菌人工染色體(BAC)，并且所述靶標核酸是第二細菌人工染色體(BAC)。

19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的方法，其中所述靶標核酸是宿主細胞基因組。