[發明專利]絲氨酸蛋白酶變體以及對其進行編碼的多核苷酸

在審

• 申請號: 201780044163.1
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN109642225A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 綾部圭;松井知子;富木亞紀;Y.倉方;E.P.弗里斯;J.E.尼爾森;R.A.帕奇
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N9/58
• 分類號: C12N9/58
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種蛋白酶變體，其在對應于SEQ ID NO:3的多肽的位置39、50、57、60、74、81、84、109、110、111、115、117、124、128、142、145、146、154、182、183、187、207、209、210、212、228、267、271、272、274、278、280、294、317、318、320、321、322、328、343、348、362或363處的一個或多個位置處包含修飾，其中該變體具有蛋白酶活性，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的成熟多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的蛋白酶相比具有增加的熱穩定性。

2.如權利要求1所述的變體，其中該變體包含至少一個選自下組的取代和/或缺失或由其組成，該組由以下組成：SEQ ID NO:3的多肽的I39M、I39R、I39L、I39C、S50C、K57R、S60P、S60D、E74W、E81A、E81E、E81K、E81R、I84C、D109N、D109P、D110N、F111P、N115D、N115L、E117D、N124Q、N124L、N124W、G128A、Q142R、Q142W、N145A、N145D、N145E、N145G、N145K、N145Q、N145V、T146A、T146D、T146E、T146W、T146Y、Q154R、Q154V、Q154W、Q154Y、Q182G、Q182R、S183L、S183P、S187L、Q207R、V209L、E212E、I228R、D267N、V271C、S272C、S272R、S272V、G274G、G278S、D280N、S294A、S317A、S317G、S317S、S318N、G320C、K321A、K321G、A322S、T328C、K343C、P348A、T362A、A363C、S318*和S210*，其中該變體具有蛋白酶活性，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中該蛋白酶是屬于S53家族的絲氨酸蛋白酶，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的蛋白酶相比具有增加的熱穩定性。

3.根據權利要求1-2中任一項所述的變體，其在對應于SEQ ID NO:3的多肽的位置39、60、74、81、84、109、115、117、142、145、146、154、182、183、187、209、210、212、228、267、272、280、294、317、318、348或362處的位置處包含修飾，其中該變體具有蛋白酶活性，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，其中該蛋白酶是屬于S53家族的絲氨酸蛋白酶。

4.如權利要求3所述的變體，其中該變體包含一個或多個選自下組的取代和/或缺失或由其組成，該組由以下組成：SEQ ID NO:3的多肽的I39M、I39R、I39L、I39C、S60D、I84C、N115D、N115L、E117D、N145G、N145Q、N145V、N145D、N145K、N145K、N145A、N145E、S183L、S183P、D280N、Q182G、Q182R、E81R、E81K、E81E、E81A、I84C、Q154V、Q142W、Q142R、T146A、T146W、T146Y、T146E、T146D、I228R、D267N、S272V、S272R、E212E、S294A、T362A、E74W、S187L、P348A、D109P、S317A、S317G、S317S、S317A、S318*和S210*，其中該變體具有蛋白酶活性，并且其中該變體與SEQ ID NO:3的多肽具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％、但小于100％的序列同一性，并且其中該增加的熱穩定性是在55至60攝氏度范圍內的溫度下孵育30min后測量的增加的殘余活性。