[發(fā)明專利]用于產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的組合物和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780042236.3
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN109415745B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金京憲;王大毛;金度亨
• 申請（專利權(quán)）人: 高麗大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團
• 主分類號: C12P19/02
• 分類號: C12P19/02;C12P19/14;C07H3/02;C12N9/24
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 彭雪瑞;臧建明

本發(fā)明涉及一種用于產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的組合物和產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的方法，更具體地說本發(fā)明提供一種通過對β?葡聚糖顯示β?1,6?內(nèi)切葡聚糖酶活性的β?1,6?內(nèi)切葡聚糖酶以高產(chǎn)率產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的組合物和方法。

背景技術(shù)

β-葡聚糖(β-glucan)是由通過糖苷鍵(glycosidic bond)連接的葡萄糖殘基構(gòu)成的多糖(polysaccharide)，且是構(gòu)成酵母、蘑菇等的細胞壁的極重要組分。β-葡聚糖已長期廣泛用于例如抗氧化劑效果、抗癌功能、皮膚保護劑等的應(yīng)用。

根據(jù)構(gòu)成聚合物的鍵類型將β-葡聚糖劃分成β-1,3-葡聚糖、β-1,4-葡聚糖以及β-1,6-葡聚糖，且已知β-1,6-葡聚糖相較于其它β-1,3-鍵或β-1,4-鍵以較小量存在于自然界中。衍生自皰臍衣屬(Lasallia pustulata)的石耳素是β-1,6-葡聚糖的熟知代表性實例，且昆布糖也熟知為構(gòu)成棕色海藻的β-1,3-1,6-葡聚糖。

已知β-1,6-葡聚糖酶隨機裂解β-葡聚糖的β-1,6-糖苷鍵(β-1,6-glycosidiclinkages)，且根據(jù)碳水化合物活性酶數(shù)據(jù)庫(Carbohydrate Active enZYmes database；CAZy；http://www.cazy.org/)，已知β-1,6-葡聚糖酶屬于糖苷水解酶(glycosidehydrolase，GH)家族5和糖苷水解酶家族30。衍生自真菌的β-1,6-葡聚糖酶主要報道為β-1,6-葡聚糖酶，且到目前為止無細菌β-1,6-葡聚糖酶的報道。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

本發(fā)明的目標是提供一種能夠由β-葡聚糖產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的新型β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的用途。

技術(shù)解決方案

為實現(xiàn)上述目標，本發(fā)明提供一種用于產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的組合物，所述組合物包含β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶(β-1,6-endoglucanase)(包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列)，其中β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶使用選自昆布糖(laminarin)和石耳素(pustulan)組成的組中的一或多個作為基質(zhì)。

本發(fā)明還提供一種產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的方法，所述方法包含使包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶(β-1,6-endoglucanase)與作為基質(zhì)的選自昆布糖(laminarin)和石耳素(pustulan)組成的組中的一或多個進行反應(yīng)。

有利效果

本發(fā)明提供一種關(guān)于β-葡聚糖展現(xiàn)β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶活性的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶。

β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶可使用昆布糖或石耳素作為基質(zhì)，由此提供高以產(chǎn)率產(chǎn)生龍膽二糖或葡萄糖的效果。

附圖說明

圖1是確認本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的表達的凝膠電泳照片。

圖2示出確認本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的最優(yōu)活性pH值的結(jié)果。

圖3示出確認本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的最優(yōu)活性溫度的結(jié)果。

圖4示出確認本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的熱穩(wěn)定性的結(jié)果。

圖5是本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶關(guān)于石耳素的水解的雙倒數(shù)繪圖(Lineweaver-Burk plot)。

圖6a和圖6b示出本發(fā)明的β-1,6-內(nèi)切葡聚糖酶的水解產(chǎn)物關(guān)于石耳素的TLC分析結(jié)果和HPLC分析結(jié)果。