[發明專利]具有降低的唾液酸殘基的乙酰化率的糖蛋白

有效

• 申請號: 201780041807.1
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN109415426B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: U·克朗泰勒;C·托雷拉
• 申請（專利權）人: 赫克薩爾股份公司
• 主分類號: C07K14/505
• 分類號: C07K14/505;A61K38/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張建;黃革生

本發明涉及生產與促紅細胞生成素受體(EpoR)相互作用或作為其激動劑起作用的糖蛋白的方法或工藝，所述糖蛋白具有改變的效能，其中所述方法或工藝包含所述糖蛋白在適合的表達系統中的異源表達，并且其中提供至少一個步驟，其導致糖蛋白中唾液酸殘基的乙酰化率降低(圖16)。

本發明涉及具有降低的唾液酸殘基乙酰化率的糖蛋白。

唾液酸是神經氨酸的N-或O-取代衍生物的通稱，神經氨酸是具有9碳骨架的單糖。在N-乙酰神經氨酸(Neu5Ac)之后，最常見的種類是N-羥乙酰基神經氨酸(Neu5Gc)和O-乙酰化衍生物。

唾液酸廣泛分布于動物組織中，并且在較小程度上分布于其他生物體中，從植物和真菌到酵母和細菌，主要在糖蛋白中，其中它們出現在與后者結合的聚糖末端。

聚糖與蛋白質的共價結合代表了一種進化機制，通過該機制可以顯著增加蛋白質組的多樣性。蛋白質糖基化的多種多樣機制進化的情況證明了這種蛋白質修飾的進化益處和總體相關性。這些機制的范圍從非酶糖化到復雜的翻譯后糖基化，即牽涉幾種酶修飾的多步驟和多重-細胞室過程。

圖17顯示唾液酸家族。一個唾液酸分子可攜帶一個或幾個乙酰基。N-乙酰基-神經氨酸是其中最常見的。

乙酰化唾液酸似乎牽涉許多生物現象。糖結構在蛋白質-蛋白質相互作用中發揮作用，它們可以是折疊成正確的功能性構象的先決條件。它們在發育和惡性過程中的表達顯著性和可變性、也作為所謂的“癌胚抗原”的一部分啟示它們參與許多生理學病理過程。并不令人驚奇地，損害聚糖部分合成或與蛋白質的連接的遺傳缺陷引起多種人類疾病。這些糖結構可以進一步被修飾，從而導入額外的多樣化。這種修飾的一個實例是乙酰化。它作為細胞相互作用的有效調節劑的作用將乙酰化與細胞功能的其他生物化學調節例如蛋白質磷酸化或用N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和甲基化修飾分類。

唾液酸的乙酰化顯然進一步增加了糖基化的多樣性，即連接的糖另外被內源性地酶促修飾。唾液酸是末端聚糖的這種修飾的原型實例，而乙酰化是這種額外修飾的普遍類型。天然存在的唾液酸具有九碳骨架并且可在其所有羥基上乙酰化。這意味著它們可以在C4、C7、C8和C9位被乙酰化。每種唾液酸可以被修飾一次，但也可以是單一唾液酸的多種衍生物，從而生成幾種組合模式，特別是對于攜帶多于一個唾液酸的糖結構。

考慮到糖基化對蛋白質功能的明顯重要性和顯而易見的顯著修飾空間，大量努力通過靶向修飾其聚糖結構來優化蛋白質的治療性質。最近，這種新一代生物制藥的前兩個例子獲得了上市許可：莫加木珠單抗(mogamulizumab)和阿托珠單抗

然而，糖基化的靶向修飾不限于單克隆抗體。達依泊汀α是一個實例，其中球狀蛋白的特征也得到改善，在這種情況下，通過添加兩個唾液酸化的碳水化合物鏈導致延長的效能，即降低的治療頻率。

然而，雖然這些方法中的一些集中于血清半衰期和其他因素的改善，但似乎在狹義上的效能改變尚未成為潛在定性修飾的焦點。對于紅細胞生成刺激劑(ESA)尤其如此，其用于增加血液的氣體(氧氣/二氧化碳)運輸能力。

與ESA療法相關的一個主要風險是死亡率增加。作為最突出的風險，心血管事件發生在血紅蛋白(Hb)的高度增加時，這被討論是由ESA誘發的紅細胞(RBC)增加引起的。

本發明的一個目的在于提供一種用于改變治療糖蛋白效能的新方法。

本發明的另一個目的在于提供一種用于修飾紅細胞生成刺激劑以增加其效能的新方法。

本發明的另一個目的在于提供一種用于修飾紅細胞生成刺激劑的具有降低的副作用風險和/或死亡率的新方法。

利用本發明的獨立權利要求的方法和方式實現這些目的。從屬權利要求涉及優選的實施例。

發明概述