[發明專利]用于檢測2個以上的目標核酸的引物組、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201780041128.4
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN109415721B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 宮本重彥;西園貴志
• 申請（專利權）人: 株式會社鐘化
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12Q1/6844
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇

1.一種引物組，其是用于制備能夠在固相載體上檢測的核酸擴增產物的引物組，其包含：

末端引物A，其包含在3’末端部含有與第1目標核酸的堿基序列的互補序列的3’末端部雜交的堿基序列的多核苷酸，

第k雙頭引物，其包含在5’末端側連接的2個多核苷酸，所述2個多核苷酸中的一個在3’末端部含有與第k目標核酸的堿基序列的3’末端部雜交的堿基序列，所述2個多核苷酸中的另一個在3’末端部含有與第(k+1)目標核酸的堿基序列的互補序列的3’末端部雜交的堿基序列，和

末端引物B，其包含在3’末端部含有與第N目標核酸的堿基序列的3’末端部雜交的堿基序列的多核苷酸；

其中，N為2以上的整數，

k為從1到N-1的整數，

作為所述第k雙頭引物，包含k為1的情況至k為N-1的情況，

所述末端引物A和所述末端引物B中的一個還包含標記部，所述標記部為標記物質或能夠與標記物質結合的標簽；另一個還包含結合部，所述結合部為能夠與固相載體結合的標簽。

2.根據權利要求1所述的引物組，其中，

所述結合部為含有能夠與所述固相載體結合的多核苷酸的標簽。

3.一種檢測2個以上的目標核酸的方法，其包含：

檢測用試樣制備工序：包含將從分析對象試樣獲得的核酸作為模板，使用權利要求1或2所述的引物組進行核酸擴增反應，和

檢測工序：將在所述檢測用試樣制備工序中得到的核酸擴增反應的產物用作檢測用試樣，使有可能含有檢測用核酸的所述檢測用試樣與固相載體接觸，所述檢測用核酸含有連接的2個以上的目標核酸、標記部和結合部，所述標記部為標記物質或能夠與標記物質結合的標簽，所述結合部為能夠與固相載體結合的標簽，所述固相載體的至少一部分包含能夠與所述結合部結合的部分，以所述標記部為指標，對所述固相載體的所述部分中的所述檢測用核酸進行檢測。

4.根據權利要求3所述的方法，其中，

所述檢測用試樣制備工序包含：使用2組以上的權利要求1或2所述的引物組，將從分析對象試樣獲得的核酸作為模板進行核酸擴增反應，所述2組以上的所述引物組設計為能夠制備2個以上的所述檢測用核酸，所述2個以上的所述檢測用核酸所含的2個以上的目標核酸的組合不同、且具備能夠結合在所述固相載體的不同位置的所述結合部；

所述檢測工序包含：使所述檢測用試樣制備工序中得到的所述檢測用試樣與所述固相載體接觸，將所述標記部作為指標，在所述固相載體中分別檢測所述2個以上的檢測用核酸中的每一個。

5.一種試劑盒，其是用于檢測分析對象試樣中的2個以上的目標核酸的試劑盒，其包含：

權利要求1或2所述的引物組，和

至少一部分含有能夠與所述結合部結合的部分的固相載體。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中，其含有所述固相載體作為核酸檢測裝置，所述核酸檢測裝置具備所述固相載體和用于收納核酸擴增反應的產物的反應體系收納部。

7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，其中，

所述標記部為能夠與標記物質結合的標簽，

所述試劑盒還包含能夠與所述標記部的所述標簽結合的標記物質。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其中，

其包含所述標記物質和所述固相載體作為核酸檢測裝置，所述核酸檢測裝置具備所述固相載體、保持所述標記物質的標記物質保持部、和用于收納核酸擴增反應的產物的反應體系收納部。